血小板第四因子在原核中的高效表达、分离纯化及活性测定

作     者：顾洁 刘拥军 卢士红 蔡英林 刁世勇 韩忠朝 

作者机构：中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所实验血液学国家重点实验室天津300020 

出 版 物：《生物技术》 (BIOTECHNOLOGY)

年 卷 期：2002年第12卷第6期

页      面：7-9页

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：国家自然科学基金(39725014) 国家攀登计划(95-专-10) 

主　　题：PF4 基因表达 分离纯化 大肠杆菌 红白血病细胞系 

摘      要：目的:构建重组表达质粒pET-32c/PF4,并在原核中进行表达,以探讨其对白血病细胞系(HEL)细胞增殖的作用.方法:通过PCR方法从含有PF4基因的PQE-60/PF4质粒中扩增PF4,用NcoⅠ/Hind Ⅲ双酶切,克隆到原核表达质粒pET-32C中,使之在BL21表达,Ni-Chelating Sepharose 亲和柱纯化,用细胞集落形成方法研究重组PF4对HEL的抑制作用.结果:菌株筛选后在大肠杆菌中获得可溶性高效表达,重组PF4占菌体总蛋白的22%.肠激酶酶切除去N-端融合部分,获得了高纯度的重组人血小板第四因子(rh-PF4),纯度为95%以上.活性实验发现重组PF4可抑制HEL细胞集落的形成,抑制率为47%.结论:原核表达质粒pET-32C可高效可溶性表达PF4,重组PF4对HEL细胞的增殖有抑制作用.