双向电泳结合质谱初步分析蛇岛蝮蛇毒蛋白质组

作     者：马驰 刘淑清 宗军卫 袁章利 孙明忠 吴玉群 孙立新 郑庆印 MA Chi;LIU Shu-Qing;ZONG Jun-Wei;YUAN Zhang-Li;SUN Ming-Zhong;WU Yu-Qun;LI Jian-Li;SUN Li-Xin;ZHENG Qing-Yin

作者机构：大连医科大学临床医学系大连116044 大连医科大学生化与分子生物学教研室大连116044 大连医科大学基础医学院生物技术系大连116044 辽宁蛇岛老铁山自然保护区管理处大连116041 觊斯西保留地大学医学院美国克利夫兰44106 

出 版 物：《动物学杂志》 (Chinese Journal of Zoology)

年 卷 期：2009年第44卷第4期

页      面：70-77页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 071010[理学-生物化学与分子生物学] 081704[工学-应用化学] 07[理学] 08[工学] 0817[工学-化学工程与技术] 070303[理学-有机化学] 0703[理学-化学] 

基　　金：大连医科大学大学生科研活动资助项目 辽宁省自然科学基金项目(No.2008S077) 大连科技厅资助项目(No.2008J22JH014) 辽宁省百千万人才工程资助项目(No.2008921069) 

主　　题：蛇岛蝮 蛇毒 双向电泳 高效液相色谱 电喷雾质谱 

摘      要：采用荧光染料(Cy5)标记中国辽宁蛇岛蝮(Gloydius shedaoensis shedaoensis,GSS)蛇毒(snake venom,SV,GSS-SV)蛋白质,获得了该蛇毒的双向十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(2D SDS-PAGE)图谱,经DeCyder软件分析,分辨出1000多个蛋白点,分子量范围在10～150ku间,等电点在4～7的蛋白质点占78.8%。凝胶后染色(post-staining)采用蛋白荧光染料Deep Purple,选取的5个蛋白点经胶内酶解,产生的肽段经高效液相色谱-电喷雾串联质谱(high performance liquid chromatography/HPLC-electro-spray ionization tandem mass spectrometry/ESI-MS/MS,HPLC-ESI-MS/MS)进行序列测定,质谱数据经Sequest Bioworks软件分析,为蛇毒L-氨基酸氧化酶、金属蛋白酶、类凝血酶、纤溶酶原激活物和磷脂酶A2的同源蛋白。本研究采用的荧光标记2DSDS-PAGE结合HPLC-ESI-MS/MS的技术适于高通量研究蛇毒蛋白组成。