苏云金芽胞杆菌大质粒pBMB28的克隆

作     者：戚军良 朱义广 尚卉 纪芳 朱倩 孙明 QI Jun-Liang;ZHU Yi-Guang;SHANG Hui;JI Fang;ZHU Qian;SUN Ming

作者机构：华中农业大学生命科学技术学院农业微生物学国家重点实验室武汉430070 

出 版 物：《遗传》 (Hereditas（Beijing))

年 卷 期：2011年第33卷第10期

页      面：1141-1146页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0904[农学-植物保护] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：国家高技术研究发展计划项目(863计划)(编号:2011AA10A203) 国家重点基础研究发展规划(973计划)项目(编号:2009CB118902) 国家自然科学基金项目(编号:30870066)资助 

主　　题：苏云金芽胞杆菌 质粒 BAC文库 染色体步移 末端测序 

摘      要：苏云金芽胞杆菌幕虫亚种YBT-020具有典型的晶胞粘连表型。在前期的研究中,通过质粒消除实验,推测晶胞粘连现象与YBT-020内生质粒pBMB28有关。为了定位质粒pBMB28上控制晶胞粘连表型的基因,首先对质粒pBMB28进行克隆。利用穿梭载体pEMB0557,成功构建了苏云金芽胞杆菌YBT-020的基因组人工染色体(BAC)文库。前期的研究表明晶体蛋白基因cry28Aa定位在质粒pBMB28上,根据cry28Aa基因序列设计引物,从文库中筛选到含有cry28Aa的重组质粒pBMB231。镜检和SDS-PAGE证明质粒pBMB231转化无晶体突变株BMB171形成的重组子BMB231可以产生Cry28Aa晶体蛋白,但不能恢复晶胞粘连表型。对重组质粒pBMB231的插入片段末端序列测定并设计引物筛选文库,通过染色体步移方式得到4个可以重叠覆盖质粒pBMB28不同区域的克隆子,从而克隆了该质粒。对这4个克隆子末端测序和酶切分析,测算出该质粒的大小约为140 kb。进一步确定应用基因组BAC文库以及重叠片段筛选的方法,可以快速有效的克隆苏云金芽胞杆菌大质粒。