过表达CXCR4的骨髓间充质干细胞对共培养低氧／复氧肾小管上皮细胞的修复作用

作     者：刘楠梅 梅长林 张金元 田军 程劲 LIU Nan-mei;MEI Chang-lin;ZHANG Jin-yuan;TIAN Jun;CHENG Jin

作者机构：第二军医大学附属长征医院肾内科解放军肾脏病研究所上海200003 解放军第四五五医院肾内科南京军区肾脏病研究所 

出 版 物：《中华肾脏病杂志》 (Chinese Journal of Nephrology)

年 卷 期：2013年第29卷第11期

页      面：830-836页

核心收录：

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100101[医学-人体解剖与组织胚胎学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金青年项目(81300568) 全军医学科技青年培育基金(13QNP050) 上海市青年科技启明星计划项目(12QA1405000) 上海市自然科学基金(11ZRl449600) 上海市基础研究重大项目(12DJ1400203) 上海市卫生系统优秀青年人才培养计划(XYQ2013088) 

主　　题：骨髓间充质干细胞 肾小管上皮细胞 修复 低氧 复氧 CXCR4 

摘      要：目的构建CXCR4质粒并转染小鼠骨髓间充质干细胞（BMSC），与低氧／复氧（hypoxia／re—oxygenation，HR）预处理的肾小管上皮细胞（RTEC）共培养，观察CXCR4-BMSC对HR—RTEC的修复效应并探讨其机制。方法采用基因转染技术获得CXCR4-BMSC（CXCR4-BMSC／eGFP，eGFP为示踪基因）和null—BMSC（BMSC／eGFP），检测转染细胞的CXCR4表达。RTEC于低氧／复氧环境中各培养12h获得***，体外模拟急性肾损伤（AKI）细胞模型。BMSC与HR—RTEC共培养12h，免疫荧光法检测HR—RTEC的凋亡细胞比例，Western印迹法检测HR—RTEC内的凋亡相关蛋白cleavedCaspase-3和Bcl．2水平，结晶紫法计数迁移BMSC数量。以HR-RTEC上清液分别干预BMSC、CXCR4-BMSC和null—BMSC，免疫荧光法检测各组BMSC角蛋白18（CKl8）的表达，ELISA法检测BMSC上清中骨形态发生蛋白7（BMP-7）、肝细胞生长因子（HGF）和白细胞介素10（IL—lo）的浓度。结果成功转染的***可高效表达CXCR4。HR—RTEC分别与BMSC、CXCR4-BMSC、null—BMSC共培养后，凋亡细胞比例均有下降，尤以与***共培养组降低最为明显，并伴随着细胞内cleavedCaspase．3水平显著降低、Bcl-2表达升高（均P〈0．05）。结晶紫计数显示CXCR4-BMSC向HR—RTEC培养室的迁移数量最多。经HR—RTEC上清液干预后，BMSC、CXCR4-BMSC和***均仅能微量表达CKl8，各组间差异无统计学意义。CXCR4过表达可显著增加BMSC的BMP-7、HGF和IL—10分泌。结论过表达CXCR4的BMSC对共培养HR—RTEC的修复效应增强，BMSC的定向迁移能力增加和迁移BMSC的分泌能力增强可能是CXCR4-BMSC的作用机制。