PP242诱导多囊肾大鼠胆管上皮细胞自噬和凋亡的机制研究

作     者：闫文帝 李珍玲 刘特思 李玉姬 原田宪一 任香善 YAN Wen-di;LI Zhen-ling;LIU Te-si;LI Yu-ji;HARADA Kenichi;REN Xiang-shan

作者机构：延边大学肿瘤研究中心吉林延边133002 金泽大学医学部病理学教研室日本金泽9208640 延边大学医学院病理学教研室吉林延边133002 

出 版 物：《中国药理学通报》 (Chinese Pharmacological Bulletin)

年 卷 期：2018年第34卷第9期

页      面：1218-1225页

核心收录：

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100101[医学-人体解剖与组织胚胎学] 10[医学] 

主　　题：自噬 凋亡 PI3K/Akt/mTOR信号通路 多囊肾大鼠 PP242 Caroli病 

摘      要：目的探讨mTORC1/2抑制剂PP242诱导多囊肾(polycystic kidney,PCK)大鼠胆管上皮细胞凋亡和自噬、抑制细胞增殖及胆管囊性扩张的分子机制。方法免疫组织化学染色法检测PCK大鼠胆管上皮细胞中p-mTOR和p-Akt的表达;WST-1比色法检测雷帕霉素和PP242对胆管上皮细胞增殖活性的抑制作用,以及LC3、Beclin-1基因沉默和自噬特异性抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)对细胞增殖的影响;蛋白免疫印迹法检测PP242对PI3K/Akt信号通路相关蛋白、自噬标识蛋白LC3和Beclin-1、cleaved caspase-3表达的影响;流式细胞术和ELISA法检测PP242对细胞凋亡的影响;免疫荧光染色法检测LC3在细胞质中的表达情况;3D细胞培养检测Rictor基因沉默和雷帕霉素联用及雷帕霉素单独应用时对大鼠胆管上皮细胞成球能力的影响。结果 p-mTOR和p-Akt在PCK大鼠胆管上皮细胞中呈过表达,PP242比雷帕霉素抑制胆管上皮细胞增殖效果更为明显,且呈浓度和时间依赖性改变(P 0. 05); PP242明显抑制PI3K/Akt信号通路相关蛋白的表达; PP242可诱导细胞凋亡和自噬,上调cleaved caspase-3、Beclin-1和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值。Rictor基因沉默和雷帕霉素联用比雷帕霉素单独应用对大鼠胆管上皮细胞的抑制作用更为明显; LC3、Beclin-1基因沉默和3-MA均可明显减弱PP242对细胞增殖的抑制作用(P 0. 05)。结论 PP242可通过PI3K/Akt/mTOR信号通路抑制PCK大鼠胆管上皮细胞的增殖,其机制与细胞凋亡和自噬密切相关。