基于PI3K/Akt通路观察五子衍宗方对老龄大鼠精原干细胞增殖的影响

作     者：刘珍财 赵海霞 马娜 陈茜 袁丁 张长城 LIU Zhen-cai;ZHAO Hai-xia;MA Na;CHEN Qian;YUAN Ding;ZHANG Chang-cheng

作者机构：三峡大学医学院湖北宜昌443002 国家中医药管理局中药药理(肿瘤)三级实验室湖北宜昌443002 三峡大学附属仁和医院湖北宜昌443001 

出 版 物：《中国实验方剂学杂志》 (Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae)

年 卷 期：2018年第24卷第23期

页      面：119-125页

学科分类：1006[医学-中西医结合] 1005[医学-中医学] 100501[医学-中医基础理论] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金项目(81573931 81503334 81774316 81373881) 

主　　题：五子衍宗方 衰老 睾丸 精原干细胞 磷酯酰肌醇3-激酶(PI3K)/丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(Akt) 

摘      要：目的：探讨五子衍宗方（Wuzi Yanzong Fang,WYF）基于磷酯酰肌醇3-激酶（PI3K）/丝氨酸苏氨酸蛋白激酶（Akt）信号通路对老龄大鼠精原干细胞增殖的作用及其机制研究。方法：以自然衰老大鼠为研究对象,将40只18月龄SPF级SD雄性大鼠随机分为老龄模型组,WYF低、中、高剂量组,每组10只,另以10只2月龄大鼠作为青年组。WYF低、中、高剂量组分别灌胃给药0.4,0.8,1.6 g·kg^-1,青年组、老龄模型组分别灌胃给予生理盐水,每周停药2 d,持续给药4个月。末次给药后麻醉处死大鼠,快速取出睾丸组织。免疫荧光法检测Sertoli细胞数量,实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）,前髓细胞锌指蛋白（PLZF）,干细胞因子（SCF）和骨形态蛋白4（BMP4）mRNA表达水平,免疫荧光法检测精原干细胞数量及增殖细胞核抗原（PCNA）的表达,蛋白免疫印迹法（Western blot）和免疫荧光法检测磷酯酰肌醇3-激酶（PI3K）和磷酸化丝氨酸苏氨酸蛋白激酶（p-Akt）的表达与定位。结果：与青年组比较,老龄模型组Sertoli细胞数量未见明显差异,而GDNF,PLZF,SCF和BMP4 mRNA表达水平显著降低,精原干细胞数量减少,PCNA表达下降,PI3K,p-Akt蛋白表达降低（P〈0.01）;与老龄模型组比较,WYF各剂量组GDNF,PLZF,SCF和BMP4 mRNA表达水平显著升高,精原干细胞数量增多,PCNA表达上调,PI3K,p-Akt表达明显增多（P〈0.05,P〈0.01）。结论：WYF能够明显促进老龄大鼠精原干细胞的增殖,其作用机制可能与调节睾丸内PI3K/Akt信号通路有关。