副溶血性弧菌耐热直接溶血毒素基因的克隆

作     者：吴振龙 聂军 鲍慧宁 徐兵 王红 

作者机构：第一军医大学流行病学教研室广东广州510515 安徽省铜陵市人民医院安徽铜陵244000 军事医学科学院生物工程研究所北京100850 

出 版 物：《第一军医大学学报》 (Journal of First Military Medical University)

年 卷 期：2001年第21卷第2期

页      面：136-137,139页

核心收录：

学科分类：0831[工学-生物医学工程（可授工学、理学、医学学位）] 08[工学] 

主　　题：副溶血性弧菌 直接溶血毒素 大肠杆菌 克隆 DNA PCR 

摘      要：目的探讨克隆副溶血性弧菌（Ｖｐ）耐热直接溶血毒素基因的方法。方法用ＰＣＲ技术扩增目的基因，双酶切载体 ｐＵＣ１９和目的基因 ＤＮＡ，连接并转化大肠杆菌 ＪＭ１０９。对重组质粒进行 ＰＣＲ鉴定、酶切鉴定和序列分析。结果凝胶电 泳显示，标准株Ｖｐｌ４－９０基因组ＤＮＡ的ＰＣＲ产物长约６００ ｂｐ。阳性克隆的ＰＣＲ产物也为一长约６００ ｂｐ）的条带，经双 酶切可切出一约 ６００ ｂｐ的条带。 ＤＮＡ 测序结果表明与 Ｇｅｎｅｂａｎｋ中的序列有 ９９．６５％的同源性。结论利用该方法成功 克隆了目的基因，为制备用于现场检测的基因探针和Ｖｐ的保护性菌苗以及阐明Ｖｐ的致病机理奠定了基础。