nm23-M2cDNA的克隆、表达及抗体制备

作     者：李茂萍 何俊琳 王应雄 翁亚光 刘学庆 陈雪梅 Mao-ping LI;Jun-lin HE;Ying-xiong WANG;Ya-guang WENG;Xue-qing LIU;Xue-mei CHEN

作者机构：重庆医科大学公共卫生学院遗传优生教研室 

出 版 物：《生殖与避孕》 (Reproduction and Contraception)

年 卷 期：2006年第26卷第2期

页      面：67-71,120页

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100102[医学-免疫学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(NO.30270510) 

主　　题：rim23-M2 克隆 表达 抗体 

摘      要：目的:通过基因工程技术表达和纯化重组nm23-M2蛋白,进而制备高效价、高特异性的抗血清。方法:构建在大肠杆菌中高效表达pQE30/nm23-M2表达质粒,Ni+-NTA亲和层析纯化;用纯化蛋白免疫兔,制备抗血清并纯化,琼脂双向扩散法测效价,免疫组织化学法比较它与抗NM23-H2抗体的特异性。结果:nm23-M2cDNA序列完全正确,表达的17kD可溶性融合蛋白占菌体总蛋白45%,纯化后纯度97%以上,抗血清效价为1∶64-128,提纯后纯度在90%以上,特异性高于抗NM23-H2抗体。结论:成功构建了pQE30/nm23-M2质粒,获得高纯度重组nm23-M2蛋白(rNM23-M2),并制备了高效价、高度特异性的抗血清,为进一步研究nm23-M2基因功能和蛋白作用奠定了基础。