日本血吸虫体表蛋白rSj29的保护性效果

作     者：陈虹 傅志强 陈雷 邱春辉 付光伟 李晔 邵东华 冯新港 林矫矫 CHEN Hong;FU Zhi-qiang;CHEN Lei;QIU Chun-hui;FU Guang-wei;LI Ye;SHAO Dong-hua;FENG Xin-gang;LIN Jiao-jiao

作者机构：中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点开放实验室上海200241 上海师范大学生命与环境科学学院上海200234 福建农林大学动物科学学院福州350002 扬州大学兽医学院扬州225009 

出 版 物：《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 (Chinese Journal of Parasitology and Parasitic Diseases)

年 卷 期：2009年第27卷第6期

页      面：476-482页

核心收录：

学科分类：1002[医学-临床医学] 100201[医学-内科学(含：心血管病、血液病、呼吸系病、消化系病、内分泌与代谢病、肾病、风湿病、传染病)] 10[医学] 

基　　金：国家科研业务费项目(2007-08) 国家科技支撑计划项目(No.2006BAD06A09) 

主　　题：日本血吸虫 体表蛋白 荧光定量PCR 免疫组化 

摘      要：目的克隆表达日本血吸虫体表蛋白Sj29基因,分析其表达特性和免疫保护效果。方法根据日本血吸虫体表蛋白Sj29基因序列(GenBank登录号为AY814537)设计引物,PCR扩增目的基因,生物信息技术分析序列特性。将目的基因部分片段亚克隆到原核表达载体pET28c中,构建重组质粒pET28c-Sj29,将其转至大肠埃希菌后用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,组氨酸(His)柱亲和层析法纯化重组蛋白;蛋白质印迹(Western blotting)分析其免疫原性。30只雌性BALB/c小鼠均分3组,实验组每鼠皮下多点注射重组蛋白rSj29共100μl(0.1mg/ml,用206佐剂配制)、佐剂对照组和空白(PBS)对照组,分别免疫3次,每次间隔2周。末次免疫后2周用血吸虫尾蚴攻击感染小鼠,每鼠40±2条,感染后第53天剖杀,收集虫体计算减虫率;取肝脏和粪便计算减卵率。ELISA法检测实验鼠血清特异性IgG抗体水平,免疫组织化学法检测rSj29蛋白在各期虫体的定位,荧光定量PCR法分析各期虫体及攻击感染后42d虫体Sj29基因表达水平。结果获得576bp的Sj29基因。重组蛋白的相对分子质量(Mr)为22900,以包涵体形式存在。Western blotting表明,重组蛋白可被免疫小鼠血清和感染日本血吸虫的小鼠血清识别。攻击感染后42d,小鼠体内Sj29基因转录水平分别为佐剂对照组和空白对照组虫体的9.1倍和51.8倍。实验组小鼠成虫数(15.4±5.9)、肝组织虫卵数(40143.3±2995.9)和粪便虫卵数(3803.9±110.9)与空白对照组相比,差异均有统计学意义(P0.05)。ELISA结果显示,免疫小鼠可产生高滴度(1∶32000)特异性IgG抗体。免疫组织化学结果表明,重组蛋白rSj29可在7、14d童虫,28、32d成虫和42d雄、雌虫的体表表达。荧光定量PCR结果表明,虫龄为32d的日本血吸虫成虫Sj29基因转录水平最高。结论重组蛋白rSj29有一定的免疫保护效果。