青虾眼柄组织总RNA提取方法的比较和分析

作     者：王宁 傅洪拓 乔慧 吴滟 龚永生 蒋速飞 熊贻伟 Wang Ning;Fu Hongtuo;Qiao Hui;Wu Yan;Gong Yongsheng;Jiang Sufei;Xiong Yiwei

作者机构：南京农业大学无锡渔业学院江苏无锡214081 中国水产科学研究院淡水渔业研究中心农业部水生动物遗传育种和养殖生物学重点开放实验室江苏无锡214081 

出 版 物：《中国农学通报》 (Chinese Agricultural Science Bulletin)

年 卷 期：2011年第27卷第3期

页      面：378-382页

学科分类：0710[理学-生物学] 071010[理学-生物化学与分子生物学] 081704[工学-应用化学] 0908[农学-水产] 07[理学] 08[工学] 0817[工学-化学工程与技术] 09[农学] 

基　　金：中央级公益性科研院所基本科研经费专项资金项目"青虾性腺抑制激素和蜕皮抑制激素基因的克隆及其与性状的关联分析" 农业部农业科技跨越计划"青虾优良品系的规模化繁育和产业化示范" 江苏省高技术研究项目"青虾新品系的选育"(BG2007328) 

主　　题：青虾 眼柄 RNA提取 

摘      要：为了找到最适合青虾眼柄总RNA抽提的方法,本试验先后使用RNAiso Plus、RNeasy Mini Kit、Unizol等产品抽提青虾眼柄总RNA并在方法上进行了改良,通过电泳、紫外分光光度计和RT-PCR对总RNA进行检测和分析。结果表明RNAiso法抽提的RNA色素含量高;改良RNAiso法抽提的RNA有部分降解,含色素少,对反转录酶有一定的抑制作用但不影响RT-PCR;RNeasy Mini Kit能有效去除抑制反转录酶活性的色素且RNA无降解,但DNA污染严重;RNAiso结合RNeasy Mini Kit法和Unizol结合RNeasy Mini Kit法提取的RNA均无DNA污染,也没有抑制反转录酶活性的色素,但后者所提的RNA完整性好。因此,Unizol结合RNeasy Mini Kit法最适合青虾眼柄总RNA的提取,可获得高质量的RNA用于RT-PCR、cDNA文库构建、定量PCR等实验。