人乳头瘤病毒6bL1双顺反子载体的构建及其在哺乳动物细胞内的表达

作     者：邓列华 殷董 胡云峰 田静 计雄飞 范洪涛 郭秀枝 林泽 赵永铿 DENG Lie-hua;HU Yun-feng;GUO Xiu-zhi;LIN Ze;ZHAO Yong-keng

作者机构：暨南大学附属第一医院皮肤科广州510630 陕西省人民医院皮肤科 广州市天河区慢性病防治中心皮肤性病科 福建医科大学附属第一医院皮肤科 Medical Department of JohnsonRadnor PA USA 

出 版 物：《中华皮肤科杂志》 (Chinese Journal of Dermatology)

年 卷 期：2011年第44卷第5期

页      面：347-349页

核心收录：

学科分类：1002[医学-临床医学] 10[医学] 

基　　金：广东省自然科学基金(04021019) 暨南大学自然科学基金团队项目(620026) 

主　　题：人乳头瘤病毒6b型 细胞内表达 哺乳动物 双顺反子载体 NIH3T3细胞 绿色荧光蛋白 双顺反子表达载体 真核表达质粒 

摘      要：目的构建尖锐湿疣患者人乳头瘤病毒6b型晚期基因（HPV6bLI）的双顺反子表达载体，并使其在哺乳动物细胞内表达，以期建立含有HPV6bLI的细胞模型。方法表达质粒pEGFP—HPV6bL1经双酶切纯化后与经过相同双酶切的真核表达质粒pIRES2-EGFP连接，酶切鉴定，挑选阳性克隆进行测序。重组质粒pIRES2-HPV6bL1-EGFP转染进小鼠成纤维细胞（NIH3T3），荧光显微镜下观察EGFP蛋白的表达，RT—PCR检测HPV6b L1 mRNA的生成。结果成功构建含HPV6bL1的重组质粒pIRES2-HPV6bL1-EGFP。重组体成功转染进NIH3T3细胞，并用G418筛选。同时荧光倒置显微镜下可观察到细胞内有绿色荧光蛋白的表达。进一步进行RT—PCR，检测到HPV6bL1mRNA的生成。结论成功构建携带HPV6bL1的重组体pIRES2-HPV6bL1-EGFP并转染入NIH3T3细胞。经荧光倒置显微镜观察及RT—PCR方法检测证明HPV6bLI在NIH3T3细胞内成功表达。