5-aza-CdR增强吉非替尼对人非小细胞肺癌细胞株H1650敏感性机制的研究

作     者：李小优 吴建中 曹海霞 吴剑秋 冯继锋 LI Xiao-you;WU Jian-zhong;CAO Hai-xia;WU Jian-qiu;FENG Ji-feng

作者机构：南京医科大学附属肿瘤医院内科学实验室江苏南京210009 南京医科大学附属肿瘤医院肿瘤内科江苏南京210009 

出 版 物：《中华肿瘤防治杂志》 (Chinese Journal of Cancer Prevention and Treatment)

年 卷 期：2012年第19卷第6期

页      面：423-427页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

基　　金：江苏省科技厅科研基金(BK2009446) 吴阶平医学基金(320.6700.09050) 

主　　题：癌,非小细胞肺 表皮生长因子受体 DNA甲基化 吉非替尼 5-aza—CdR H1650细胞 

摘      要：目的:探讨EGFR基因启动子甲基化水平与人非小细胞肺癌细胞株H1650对吉非替尼敏感性之间的关系。方法:5-aza-CdR和吉非替尼单独或联合用药作用于H1650细胞株后,应用甲基化特异性PCR法检测EGFR基因启动子区甲基化状态;CCK-8法检测细胞增殖率;流式细胞仪技术检测细胞凋亡率变化;蛋白质印迹法和实时荧光定量PCR法检测EGFR蛋白和mRNA的表达情况。结果:5-aza-CdR可去除H1650细胞EGFR基因启动子区甲基化;CCK-8法检测结果显示,H1650对吉非替尼的敏感性较差,5-aza-CdR去甲基化后联合运用吉非替尼处理72h,联合用药组IC50为(2.93±0.95)μmol/L,与吉非替尼组(14.53±1.13)μmol/L、5-aza-CdR组(4.91±1.42)μmol/L比较显著降低,P0.05;流式细胞仪技术结果显示,联合用药组细胞凋亡率为(83.62±4.3)%,与吉非替尼组(20.29±2.9)%、5-aza-CdR组(25.73±7.5)%比较,差异有统计学意义,P0.05;蛋白质印迹法和实时荧光定量PCR法结果显示,吉非替尼与5-aza-CdR联合用药干预72h后细胞EGFR蛋白和mRNA表达显著下降,与单药组相比,具有统计学意义,P0.05。结论:EGFR基因启动子区甲基化可能是非小细胞肺癌细胞株H1650对吉非替尼获得性耐药的机制之一。