MT1-MMP miRNA干扰载体的构建及沉默效果评价

作     者：杨聪翀 朱丽芳 宁天云 宋晓陵 张玮 刘来奎 YANG Cong-chong;ZHU Li-fang;NING Tian-yun;SONG Xiao-ling;ZHANG Wei;LIU Lai-kui

作者机构：南京医科大学口腔医学研究所.附属口腔医院基础教研室江苏南京210029 

出 版 物：《口腔生物医学》 (Oral Biomedicine)

年 卷 期：2012年第3卷第3期

页      面：117-119,123页

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：国家自然科学基金(30872903) 江苏高校优势学科建设工程资助项目 

主　　题：口腔黏膜鳞癌 膜型基质金属蛋白酶-1 miRNA干扰 基因 

摘      要：目的:构建膜型基质金属蛋白酶-1(membrane-type matrix metalloproteinase-1,MT1-MMP)基因miRNA干扰载体,检测其对靶基因的沉默效率。方法:设计4种MT1-MMP基因特异性miRNA寡聚单链DNA,利用载体构建试剂盒构建MT1-MMP基因特异性干扰质粒,挑选阳性克隆,测序无误后扩增,表明载体构建成功。抽提干扰质粒,用脂质体2000转染HEK293细胞,通过实时荧光定量PCR法检测干扰载体对靶基因的干扰效果。结果:本实验成功构建了MT1-MMPmiRNA干扰载体,筛选出最有效的干扰载体X173-4,并检测出其对靶基因的沉默效率可达到75%。结论:本实验结果为进一步研究MT1-MMP在口腔癌侵袭转移机制中的作用提供实验基础。