快速检测大肠杆菌O157的LAMP方法的建立与评价

作     者：张雪寒 何孔旺 叶青 倪艳秀 温立斌 李彬 王小敏 周俊明 郭容利 

作者机构：江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 

出 版 物：《中国兽医学报》 (Chinese Journal of Veterinary Science)

年 卷 期：2013年第33卷第7期

页      面：1027-1031页

核心收录：

学科分类：090601[农学-基础兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：国家科技支撑计划资助项目(2012BAK08B07) 江苏省农业支撑计划-社会发展项目(BE2011771) 江苏省自然科学基金资助项目(BK2010068) 

主　　题：环介导恒温扩增技术 rfbE基因 快速检测 

摘      要：利用DNA环介导恒温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP),以rfbE基因为靶序列,设计LAMP引物,建立LAMP反应体系与条件,进行灵敏度和特异性试验。结果显示,整个检测过程仅需1h即可通过肉眼直接目测试验结果。在灵敏度试验中,rfbE-LAMP对O157菌液和模拟阳性样品的最低检测限分别为1CFU/mL和1CFU/g。在特异性试验中,以其他血清型大肠杆菌以及沙门杆菌基因组DNA为模板对rfbE基因进行检测,均没有发生非特异性扩增反应。试验建立的LAMP检测方法具有操作简单安全、检测灵敏度高、特异性高的特点,能够满足基层实验室、应急检测或现场监测等方面的使用需求。