传染性造血器官坏死病毒糖蛋白原核表达及免疫原性分析

作     者：徐黎明 刘红柏 尹家胜 卢彤岩 

作者机构：中国水产科学研究院黑龙江水产研究所哈尔滨150070 

出 版 物：《病毒学报》 (Chinese Journal of Virology)

年 卷 期：2013年第29卷第5期

页      面：529-534页

核心收录：

学科分类：090601[农学-基础兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：国家科技支撑计划(2012BAD25B02) 中央级公益性科研院所基本科研业务费专项(2013A0605) 黑龙江省冷水性鱼类种质资源及增养殖重点开放实验室(201104) 

主　　题：传染性造血器官坏死病病毒 病毒表面糖蛋白 原核表达 

摘      要：为了建立传染性造血器官坏死病毒的免疫学检测方法,本研究以IHNV-Sn分离株基因组提取物为模板,利用RT-PCR方法扩增出其表面糖蛋白(glycoprotein,G)的基因序列(1527bp)。将该基因克隆到pET27b(+)表达载体中构建出重组质粒pET27b-G,通过大肠杆菌BL21(DE3)表达菌株获得高效表达。SDS-PAGE电泳分析显示表达蛋白约55kD,大部分以包涵体的形式表达。利用尿素变性复性处理后获得高纯度的纯化蛋白,制备兔抗血清。间接ELISA结果显示,所制备的兔抗血清能够与重组糖蛋白和IHNV-Sn病毒株表面糖蛋白发生特异性反应,与重组蛋白的反应效价为1∶20 000;间接免疫荧光结果显示,该兔抗血清可与IHNV-Sn分离株和IHNV参考毒株产生特异性的荧光,以上结果说明本研究所表达的IHNV糖蛋白具有良好的免疫原性和免疫反应性,该研究为IHNV检测方法的建立及疫苗的研制提供了基础材料和理论依据。