稻曲病菌UV-2菌株细菌人工染色体文库构建及分析

作     者：刘庆丽 王晓明 王革娇 罗朝喜 谭新球 罗美中 

作者机构：华中农业大学生命科学技术学院湖北武汉430070 华中农业大学植物科学技术学院湖北武汉430070 湖南省农业科学院植物保护研究所湖南长沙410125 

出 版 物：《微生物学通报》 (Microbiology China)

年 卷 期：2013年第40卷第9期

页      面：1715-1722页

核心收录：

学科分类：09[农学] 0904[农学-植物保护] 090401[农学-植物病理学] 090402[农学-农业昆虫与害虫防治] 

基　　金：农业部公益性行业专项项目(No.200903039-3) 

主　　题：大分子DNA 细菌人工染色体 水稻 稻曲病 稻曲病菌 

摘      要：【目的】稻曲病(Rice false smut)是由稻曲病菌[Villosiclava virens(Cooke)Tak.]引起的严重危害水稻的真菌病害。构建稻曲病菌UV-2的大片段DNA细菌人工染色体(Bacterial artificial chromosome,BAC)文库,为致病相关基因的鉴定及在图位克隆、比较基因组学等方面的研究奠定基础。【方法】以幼嫩菌丝为材料制备大分子基因组DNA包埋块,用Hind III部分酶解后经脉冲凝胶电泳筛选,回收大片段DNA并与pIndigoBAC536-S载体连接,连接产物转化大肠杆菌菌株DH10B T1 Phage-Resistant细胞后进行蓝白斑筛选,白色菌落捡入384孔板置于80°C低温保存。【结果】成功构建UV-2菌株的高质量、高覆盖度的BAC文库,该文库共含10 368个克隆,平均插入片段为124.4 kb,空载率小于1%,约覆盖该菌基因组的36.8倍。【结论】克服了真菌大分子基因组DNA制备难控制的技术难题,建立了首个稻曲病菌的BAC文库。该文库已作为一种公共基因组资源向研究者开放(http://***)。