结核分枝杆菌PhoP/PhoR基因重组穿梭表达质粒的构建及鉴定

作     者：梁晨 姜晓霞 张锋 王霞 吴芳 章乐 吴江东 张春军 张辉 樊超 庄睿 李文娟 张万江 

作者机构：石河子大学医学院病理生理学教研室/新疆地方与民族高发病教育部重点实验室石河子832002 石河子大学医学院第一附属医院功能科石河子832008 新疆医科大学第五附属医院烧伤整形科乌鲁木齐830011 新疆阿克苏地区第二人民医院检验科阿克苏843000 

出 版 物：《石河子大学学报（自然科学版）》 (Journal of Shihezi University(Natural Science))

年 卷 期：2013年第31卷第6期

页      面：697-701页

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100102[医学-免疫学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金项目(81260261 81160192 81260241 81160001) 新疆兵团医药卫生专项项目(2012BA022) 石河子大学高层次人才启动项目(RCZX200922) 

主　　题：结核杆菌 PhoP PhoR pMV361 

摘      要：为构建结核杆菌PhoPR双组分系统PhoP、PhoR基因的重组穿梭质粒pMV361-PhoP、pMV361-PhoR并对其进行鉴定。采用结核分枝杆菌国际标准强毒株H37Rv菌株基因组DNA为模版,利用PCR技术分别扩增PhoP、PhoR基因编码序列,先克隆于T-Vector pMD19(Simple),再亚克隆至大肠杆菌-分枝杆菌穿梭表达载体pMV361,并转化*** DH5α感受态细胞,提取所得的阳性克隆子获得重组表达质粒pMV361-PhoP、pMV361-PhoR,通过PCR及双酶切鉴定。结果显示,结核分枝杆菌国际标准强毒株H37Rv菌株基因组DNA中扩增出的PhoP、PhoR基因与GenBank公布的序列一致,经过PCR及双酶切鉴定,表明PhoP、PhoR基因均成功插入了pMV361穿梭载体。由此可知,成功构建了重组穿梭质粒pMV361-PhoP、pMV361-PhoR,为进一步研究PhoPR双组分系统奠定了基础。