人穿孔素氨基端肽段的原核表达与纯化

作     者：秦卫松 李芳秋 武建国 QIN Wei-song;LI Fang-qiu;WU Jian-guo

作者机构：第二军医大学临床医学院南京军区南京总医院解放军医学检验中心江苏南京210002 

出 版 物：《医学研究生学报》 (Journal of Medical Postgraduates)

年 卷 期：2001年第14卷第1期

页      面：9-11页

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100102[医学-免疫学] 10[医学] 

基　　金：江苏省自然科学基金资助项目!(BK9915 7) 

主　　题：穿孔素 基因重组 表达 纯化 

摘      要：目的 :用基因工程方法表达人穿孔素 (PFP)氨基端肽段 ,并加以纯化。 方法 :构建表达人 PFP蛋白 N端118个氨基酸肽段 (h PFP- N)的重组质粒 ,转化 E. coli BL 2 1菌株 ,经异丙基 -β- D-硫代半乳糖苷 (IPTG)诱导表达。在十二烷基肌氨酸钠存在下以超声处理 ,使得到的融合蛋白包涵体溶解。通过谷胱甘肽琼脂糖柱亲和层析获得纯化的 GST/h PFP- N融合蛋白 ,经凝血酶酶切去除 GST部分。 结果与结论 :p GEX- KG质粒能够高效表达 GST/h PFP- N融合蛋白 ,经谷胱甘肽琼脂糖亲和层析和凝血酶酶切后得到纯化的 h PFP- N蛋白。