水稻矮缩病毒非结构蛋白Pns6和外壳蛋白P8多克隆抗体的制备及其应用

作     者：宛柏杰 林文武 吴锦鸿 陈晓敏 吴祖建 张洁 WAN Baijie;LIN Wenwu;WU Jinhong;CHEN Xiaomin;WU Zujian;ZHANG Jie

作者机构：福建农林大学植物病毒研究所福建省植物病毒学重点实验室福建福州350002 

出 版 物：《福建农林大学学报（自然科学版）》 (Journal of Fujian Agriculture and Forestry University:Natural Science Edition)

年 卷 期：2016年第45卷第1期

页      面：42-47页

学科分类：09[农学] 0904[农学-植物保护] 090401[农学-植物病理学] 090402[农学-农业昆虫与害虫防治] 

基　　金：高等学校博士学科点专项科研基金(新教师类)(20133515120004) 国家自然科学基金(31301640) 福建省教育厅科技项目(JA13103) 

主　　题：水稻矮缩病毒 非结构蛋白Pns6 外壳蛋白P8 多克隆抗体 Dot-blot ELISA 

摘      要：利用RT-PCR的方法从感染水稻矮缩病毒(Rice dwarf virus,RDV)的水稻中克隆该病毒的运动蛋白基因S6和外壳蛋白基因S8,通过Gateway系统进行原核表达,获得表达载体p DEST17-Pns6和p DEST17-P8,将表达载体转化*** Rosetta,经IPTG诱导表达后获得分子质量约为59和46 ku含HIS标签的融合蛋白.以诱导表达的目的蛋白为抗原,免疫注射新西兰大白兔制备多克隆抗体.结果表明,Western blot检测制备的Pns6和P8抗体可特异性检测RDV,间接ELISA测定Pns6和P8抗体的效价均约为6 400倍,并建立了可靠、灵敏、特异的Dot-blot ELISA方法检测RDV.以上研究表明,RDV运动蛋白和外壳蛋白抗体均可应用于该病毒在田间的大规模调查和检测.