不同分离方法对人胚胎脑海马区神经干细胞体外生长的影响

作     者：姚瑞芹 朱海兵 徐铁军 张凤真 徐夏红 

作者机构：徐州医学院解剖学和神经生物学教研室江苏徐州221002 

出 版 物：《徐州医学院学报》 (Acta Academiae Medicinae Xuzhou)

年 卷 期：2003年第23卷第4期

页      面：298-302页

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 071006[理学-神经生物学] 

主　　题：人胚胎 海马区 神经干细胞 免疫细胞化学 胰蛋白酶 细胞培养 

摘      要：目的 比较不同分离方法对人胚胎脑海马区神经干细胞生长的影响。方法 取胎龄 8～ 12周药物流产的人胚胎脑 ,分别用胰蛋白酶消化法和机械分离法分离海马区细胞 ,均以 10 6个细胞 /ml接种到含人表皮生长因子 (h -EGF)、人碱性成纤维细胞生长因子 (h -bFGF)和人白细胞抑制因子 (h -LIF)的基础培养液中培养 ,以含1%胎牛血清 (FBS)的DMEM/F12和多聚鸟氨酸诱导分化 ,免疫细胞化学鉴定。结果 胰蛋白酶消化组和机械分离组分离到的活细胞分别占各自细胞总数的 4 8.2 %和 6 1.7% (P 0 .0 5 ) ;7天后 ,两组均形成许多直径从几十到几百个微米不等的细胞球 ,但机械分离组的细胞球数目明显多于胰蛋白酶消化组。取细胞球诱导分化及免疫细胞化学染色鉴定 ,细胞分别呈RNA -结合蛋白、β-Ⅲ管蛋白、胶质原纤维酸性蛋白和半乳糖脑苷脂免疫细胞化学反应阳性。结论 人胚胎脑海马区有神经干细胞存在 ,离体培养时能分裂增殖 ,并能被诱导分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞。机械分离法可以获得更多的活细胞 ,原代培养易形成较多的细胞球。