鹿结核病流行株融合基因Rv3872-Rv3874-Rv3875的原核表达

作     者：王文玉 宋纪伟 曾范利 时坤 李健明 张云 刘东旭 俊伟 杜锐 

作者机构：吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130118 吉林市人民医院吉林吉林132001 吉林农业大学中药材学院吉林长春130118 吉林农业大学研究生学院教育部动物生产及产品质量安全重点实验室吉林省药用动物二级实验室吉林长春130118 

出 版 物：《中国兽医科学》 (Chinese Veterinary Science)

年 卷 期：2014年第44卷第5期

页      面：515-520页

核心收录：

学科分类：090603[农学-临床兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：国家科技支撑计划项目(2011BAI03B02-1) 国家自然科学基金资助项目(31072140 31272565) 吉林省科技厅科技支撑计划项目(20120225) 

主　　题：鹿结核病 融合基因 原核表达 反应原性 

摘      要：以本实验室保存的鹿体内分离并鉴定的结核病流行株为模板,利用重叠延伸剪接技术设计融合基因的引物,扩增融合基因Rv3872-Rv3874-Rv3875,构建重组表达质粒pGEX-4T-1-Rv3872-Rv3874-Rv3875;重组表达质粒被转化入大肠杆菌BL21(DE3)后,IPTG诱导表达,并采用谷胱甘肽琼脂糖亲和层析方法对目的蛋白进行纯化。基因测序结果显示,融合基因Rv3872-Rv3874-Rv3875的序列与GenBank中序列的符合率为99.89%。SDS-PAGE分析显示,融合基因在大肠杆菌中成功被诱导表达,获得以可溶形式表达的融合蛋白,该蛋白的分子质量约为60ku。Western-blot鉴定结果显示,纯化好的融合蛋白能与鹿结核病的阳性血清发生反应,说明该融合蛋白具有良好的反应原性,这一结果为它在鹿结核病血清学诊断中的应用奠定了试验基础。