禽流感病毒NP蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

作     者：肖倩 姚露 毕振威 雷静 颜焰 闫丽萍 XIAO Qian;YAO Lu;BI Zhenwei;LEI Jing;YAN Yan;YAN Liping

作者机构：教育部动物健康与食品安全国际联合实验室江苏省动物免疫工程实验室江苏省陆生野生动物疫源疫病检测中心南京农业大学免疫研究所南京农业大学动物医学院江苏南京210095 农业部动物病毒学重点实验室浙江大学浙江杭州310058 

出 版 物：《畜牧与兽医》 (Animal Husbandry & Veterinary Medicine)

年 卷 期：2018年第50卷第12期

页      面：53-58页

学科分类：090602[农学-预防兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：国家重点研发计划项目(2016YFD0501600) 中央高校基本科研业务费(Y0201600146) 

主　　题：H5N6 禽流感病毒 单克隆抗体 NP蛋白 特异性 保守性 

摘      要：为了制备H5N6亚型禽流感病毒(AIV)的单克隆抗体(MAb),采用纯化的H5N6 AIV免疫BALB/c鼠,利用淋巴细胞杂交瘤技术制备杂交瘤细胞,通过间接ELISA方法进行筛选,获得2株能稳定分泌抗NP蛋白的杂交瘤细胞,分别命名为3D9和2B10。间接ELISA检测2株杂交瘤细胞培养上清液抗体效价分别为1∶1×10^3和1∶1×10^4,腹水的抗体效价分别达到1∶1×10^5和1∶1×10^6; 3D9和2B10亚类鉴定重链为IgM,轻链为κ链; Western blot分析表明,2株杂交瘤细胞上清均能与不同的AIV感染的尿囊液在56 kD处发生特异性反应,并能与原核表达的重组NP蛋白发生特异性反应;间接免疫荧光试验显示,2株单克隆抗体均能与不同的AIV感染的MDCK细胞产生特异性反应。以上结果表明,本研究针对H5N6 AIV的NP蛋白制备了2株单克隆抗体,且都具有较好的特异性、保守性和广谱性,为今后禽流感诊断方法的开发奠定了基础。