转基因水稻BPL9K-2事件特异性检测方法的建立

作     者：崔帅 王作平 于江辉 肖国樱 CUI Shuai;WANG Zuo-ping;YU Jiang-hui;XIAO Guo-ying

作者机构：中国科学院亚热带农业生态研究所亚热带农业生态过程重点实验室长沙410125 中国科学院大学北京100049 北京市农林科学院北京农业生物技术研究中心北京市农业基因资源和生物技术重点实验室北京100097 

出 版 物：《中国生物工程杂志》 (China Biotechnology)

年 卷 期：2018年第38卷第11期

页      面：32-41页

核心收录：

学科分类：08[工学] 09[农学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：转基因生物新品种培育科技重大专项(2016ZX08001003-001)资助项目 

主　　题：转基因水稻 旁侧序列 事件特异性检测 基因型鉴定 

摘      要：利用hiTAIL-PCR(high efficient thermal asymmetric interlaced PCR)法扩增获得了转基因水稻BPL9K-2的外源基因插入位点的左旁侧序列450bp,与水稻参考基因组数据比对发现其左边界插入在水稻基因组第10号染色体短臂的1 037 765 位核苷酸残基之后。根据水稻参考基因组序列和外源基因右边界序列,设计引物扩增得到485bp的特异片段,通过数据库比对发现其右边界插入在水稻基因组第10号染色体短臂的1 037 825 位核苷酸残基之前。因为外源基因插入和非正常重组,水稻基因组上缺失了59个核苷酸。基于左右旁侧序列,建立了转基因水稻BPL9K-2的事件特异性定性PCR检测方法,可以分别扩增到片段大小为449bp和485bp的特异条带。该方法特异性好,灵敏度高,能够在BPL9K-2基因组DNA相对含量为0.1%的模板中检测出转基因成分。依据旁侧序列,建立了快速鉴定转基因后代植株外源基因型的三引物PCR检测方法。这些方法的建立,为转基因水稻BPL9K-2的应用和检测提供了技术支持。