牛传染性鼻气管炎病毒gC结构蛋白的真核表达及其反应原性分析

作     者：张帆 刘行波 倪宏波 ZHANG Fan;LIU Xing-bo;NI Hong-bo

作者机构：黑龙江八一农垦大学动物科技学院 

出 版 物：《中国生物制品学杂志》 (Chinese Journal of Biologicals)

年 卷 期：2018年第31卷第12期

页      面：1333-1335,1339页

学科分类：08[工学] 082504[工学-人机与环境工程] 0825[工学-航空宇航科学与技术] 

基　　金：黑龙江省农垦总局攻关课题(HNK125B-11-10A HNK125B-11-08A) 

主　　题：牛传染性鼻气管炎病毒 gc蛋白 真核表达 反应原性 

摘      要：目的真核表达牛传染性鼻气管炎病毒(infectious bovine rhinotracheitis virus,IBRV)gC结构蛋白,并对其反应原性进行鉴定。方法以GenBank中登录的IBRV基因序列合成gC基因全长,构建重组真核表达质粒p CDNA4-gCHis,并进行双酶切鉴定。将鉴定正确的质粒转染MDBK细胞,收集上清,镍柱纯化带有His标签的重组gC蛋白,经Dot blot和间接免疫荧光法鉴定其反应原性。结果质粒p CDNA4-gC-His经双酶切鉴定证明构建正确,表达的重组gC蛋白相对分子质量约54 000,纯化后的浓度为0. 03 mg/mL,可与IBRV免疫的兔多抗发生反应。结论成功构建了真核表达质粒pCDNA4-gC-His,并能在MDBK细胞系中正确表达,表达的蛋白与天然IBRV gC蛋白具有相同的反应原性,为后续免疫学诊断方法的建立奠定了基础。