稳定表达犬SLAM受体的Vero细胞系的建立与应用

作     者：朱璐宇 彭丽艳 周雨霞 王喜军 步志高 ZHU Luyu;PENG Liyan;ZHOU Yuxia;WANG Xijun;BU Zhigao

作者机构：内蒙古农业大学兽医学院呼和浩特010018 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150069 

出 版 物：《内蒙古农业大学学报（自然科学版）》 (Journal of Inner Mongolia Agricultural University(Natural Science Edition))

年 卷 期：2018年第39卷第6期

页      面：7-12页

学科分类：0905[农学-畜牧学] 09[农学] 

基　　金：国家自然科学基金面上项目(31472198) 

主　　题：信号淋巴细胞活化分子 Vero细胞 犬瘟热病毒 病毒分离 

摘      要：信号淋巴细胞活化分子是(Signaling lymphocyte activation molecule,SLAM)犬瘟热病毒(Canine distemper virus,CDV)和麻疹病毒(Measles virus,MV)等麻疹病毒属病毒的主要细胞受体,在病毒入侵细胞的过程中具有重要作用。为了构建稳定表达犬SLAM(d SLAM)受体的Vero细胞系,本研究将d SLAM基因克隆至真核表达质粒p CAGG-TK-neo中,在d SLAM基因3’端引入Flag标签序列作为分子标记,并在其下游引入9 nt的Linker序列、猪捷申病毒(Porcine teschovirus,PTV) 2A基因以及红色荧光蛋白m Cherry基因,构建了重组质粒p CAGG-dSLAMFlag-mCherry。用该重组质粒转染Vero细胞,经G418压力筛选、红色荧光蛋白表达及表达绿色荧光蛋白的重组CDV(r20/8-EGFP)感染鉴定后,筛选到稳定表达d SLAM的细胞系。CDV野生型分离株JL17感染试验结果显示,JL17株在第15代次的Vero-dSLAM细胞上可良好生长,而在Vero细胞上不能形成细胞病变。结果表明,Vero-dSLAM细胞可稳定表达d SLAM,为CDV野生型毒株的分离和致病机制研究奠定了基础。