TRAIL胞膜外段融合蛋白在大肠埃希菌内可溶性表达

作     者：周海胜 夏劲松 陈治文 夏俊 刘贤锡 

作者机构：蚌埠医学院生物化学与分子生物学教研室安徽蚌埠233003 山东大学西校区分子生物学实验室山东济南250012 

出 版 物：《蚌埠医学院学报》 (Journal of Bengbu Medical College)

年 卷 期：2003年第28卷第2期

页      面：98-101页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

基　　金：安徽省教育厅自然科学研究资助项目 ( 2 0 0 2KJ2 0 7) 

主　　题：肿瘤坏死因子 细胞凋亡 蛋白质表达 大肠埃希菌 

摘      要：目的 :研究在大肠埃希菌体内可溶性表达肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体 (TRAIL)胞膜外段融合蛋白 ,为其下一步的分离纯化奠定基础。方法 :依据原核表达载体 pGEX 2T多克隆位点限制性内切酶要求 ,设计TRAIL胞膜外段PCR引物 ,对TRAIL的克隆载体进行PCR扩增 ,回收目的片段后利用DNA连接酶构建TRAIL胞膜外段原核表达载体 ,应用相关的生物学软件对目的蛋白的理化性质及其溶解性进行预测。酶切鉴定后将阳性重组体转入大肠埃希菌DH5α体内 ,分别在不同浓度异丙基硫代 β D 半乳糖苷 (IPTG)、不同诱导温度、不同诱导时间作用下 ,利用SDS PAGE分析目的蛋白可溶性表达量。结果 :PCR扩增得到TRAIL胞膜外段DNA片段 ,酶切结果证实已成功构建了TRAIL胞膜外段原核表达载体 ,预测表明 95 %以上的TRAIL胞膜外段融合蛋白是以可溶性的形式表达 ,在 0 .1mmol/LIPTG、2 0℃诱导 3～ 4h ,目的蛋白可溶性表达量达峰值 ,占菌体蛋白的 2 8%。结论