重组肠道病毒71型疫苗(汉逊酵母)抗原含量测定方法的建立

作     者：张改梅 陈磊 高帆 姚昕 李国顺 顾美荣 毛群颖 刘建凯 郑海发 ZHANG Gai-mei;CHEN Lei;GAO Fan;YAO Xin;LI Guo-shun;GU Mei-rong;MAO Qun-ying;LIU Jian-kai;ZHENG Hai-fa

作者机构：北京民海生物科技有限公司研发中心北京市新型联合疫苗工程技术研究中心北京102600 中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京102629 

出 版 物：《中国病毒病杂志》 (Chinese Journal of Viral Diseases)

年 卷 期：2018年第8卷第6期

页      面：476-480页

学科分类：1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 100705[医学-微生物与生化药学] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100103[医学-病原生物学] 10[医学] 

主　　题：肠道病毒71型(EV-A71) 疫苗 汉逊酵母 抗原含量 方法建立 

摘      要：目的建立重组肠道病毒71型疫苗(EV-A71)(汉逊酵母)抗原含量测定方法,用于重组EV-A71(汉逊酵母)疫苗的质量控制.方法以抗EV-A71(汉逊酵母)多克隆抗体为包被抗体,经辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)标记的抗EV-A71单克隆抗体为检测抗体,建立双抗体夹心酶联免疫法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA),确定定量限度及最佳定量范围,并对该方法的准确度、精密度和特异性进行方法学验证.结果线性范围为5~80U/ml,线性和平行性良好.定量下限为5U/ml,检测不同浓度的EV-A71国家抗原标准品,回收率在88%~115%,准确度良好;重复性和中间精密度测定,其变异系数均小于15%;与重组柯萨奇病毒A16、甲型肝炎灭活疫苗(HAV)、冻干水痘减毒活疫苗(VZV)、Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗(IPV)、五价口服轮状病毒减毒活疫苗(RV)等疫苗、Tris缓冲液、PBS缓冲液、破碎液、汉逊酵母宿主蛋白(HCP)均无交叉反应,其专属性良好.结论建立了重组EV-A71疫苗(汉逊酵母)抗原含量测定方法并进行了初步验证,为疫苗研制中抗原含量的质控提供了可靠的检测手段.