TPO在COH/dhfr-中的表达及生物活性测定

作     者：陈伟民 王飞 彭鑫 蔡绮君 胡颖 关艺青 CHEN Wei-min;WANG Fei;PENG Xin;CAI Qi-jun;HU Ying;GUAN Yi-Qing

作者机构：广州体育科学研究所遗传学研究室广东广州510650 广东省水生经济动物良种繁育重点实验室广东广州510275 

出 版 物：《甘肃医药》 (Gansu Medical Journal)

年 卷 期：2011年第30卷第6期

页      面：321-325页

学科分类：08[工学] 080501[工学-材料物理与化学] 0805[工学-材料科学与工程（可授工学、理学学位）] 080502[工学-材料学] 

主　　题：TPO 哺乳动物表达系统 COH/dhfr- pCDNA3.1-TPO-His pSV2-dhfr GIEMSA UT-7/EPO-Mpl 

摘      要：目的:研究获得高效表达重组蛋白TPO-His的哺乳动物表达系统稳定细胞株。方法:采用overlap PCR拼接得到带有TPO信号肽的TPO N-端功能区序列;构建重组表达载体pCDNA3.1-TPO-His,然后将其与pSV2-dhfr载体磷酸钙法共转哺乳动物表达系统细胞系COH/dhfr-,经过G418、MTX及条件培养基多重压力筛选得到高效表达重组蛋白TPO-His的稳定细胞株;通过采用GIEMSA法检测TPO刺激UT-7/EPO-Mpl细胞的分化作用来测试重组蛋白TPO-His的生物活性。结果:经过多重压力筛选获得高效稳定分泌表达目的蛋白的细胞株CHO(dhfr-)/pCDNA3.1-TPO-His,其表达量可达2.8μg/106cells/24h,纯化蛋白具有较高的生物活性。结论:研究获得具有高效分泌表达目的蛋白的稳定细胞株,其表达产物TPO-His具有较高的生物学活性。