荧光素标记的反义寡核苷酸在大鼠肾小管上皮细胞中的时相分布

作     者：刘晓波 余学清 周树录 董秀清 

作者机构：广东药学院基础学院微生物学教研室广东省广州510006 中山大学附属第一医院教育部肾脏病重点实验室 广州市花都区人民医院肾内科 

出 版 物：《检验医学与临床》 (Laboratory Medicine and Clinic)

年 卷 期：2006年第3卷第9期

页      面：417-419页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100210[医学-外科学(含：普外、骨外、泌尿外、胸心外、神外、整形、烧伤、野战外)] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(39970704) 广东省自然科学基金资助项目(980058 010763) 

主　　题：荧光素 寡核苷酸 肾小管 上皮细胞 

摘      要：目的观察反义寡核苷酸(AS-ODN)在大鼠肾小管上皮细胞株(NRK52E)中的时相分布;比较AS-ODN以脂质体(DOTAP)包裹或以游离形式转染细胞的区别。方法合成一条与大鼠骨调素(OPN)cDNA序列互补的AS-ODN,在5′端标记荧光素(FAM);将AS-ODN/DOTAP复合物(AS-ODN浓度3μmol/L)或游离AS-ODN(6μmol/L)处理培养的NRK52E细胞,于不同时间点取细胞于荧光显微镜下观察计数,同时进行普通光镜下细胞计数,计算转染效率。结果AS-ODN/DOTAP复合物在细胞中呈颗粒状分布,处理细胞3h后可见细胞胞浆中出现荧光颗粒,之后AS-ODN转移进入胞核,第8h时在胞核中可达很高浓度,并维持较长时间;游离AS-ODN在细胞中呈弥散状分布,处理细胞5h后可见细胞中出现荧光,第8h时在胞浆和胞核中可达较高浓度,并维持较长时间;AS-ODN/DOTAP复合物的转染效率明显高于游离AS-ODN;细胞是否贴壁生长及贴壁生长的细胞密度也影响AS-ODN的转染效率。结论AS-ODN转染进入细胞后最终浓聚在细胞核中,并维持较长时间;阳离子脂质体能提高AS-ODN转染速率和转染效率。