东方粘虫(Pseudaletia separata(Walker))微卫星富集文库的构建与分析

作     者：张国彦 翟保平 ZHANG Guo-Yan;ZHAI Bao-Ping

作者机构：南京农业大学昆虫学系农业部病虫害监测与治理重点开放实验室南京210095 河南省植物保护植物检疫站郑州450002 

出 版 物：《生态学报》 (Acta Ecologica Sinica)

年 卷 期：2008年第28卷第8期

页      面：3860-3867页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0904[农学-植物保护] 0901[农学-作物学] 090402[农学-农业昆虫与害虫防治] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(30571202) 

主　　题：东方粘虫 微卫星 富集文库 序列分析 

摘      要：根据生物素与链亲和素的强亲和性原理，用包被链亲和素的磁珠亲和捕捉与生物素标记的微卫星寡核苷酸探针（CA）15 （GA）15、（GTT）12、（GAT）12、（TAGA）3和（GTGA）。退火结合的含接头和微卫星序列的单链粘虫基因组DNA限制性酶切片段，获得单链目的片段。经PCR扩增形成双链后连接到pGEM—T载体上，再转化到DH5α热感受态细胞中，首次成功构建粘虫基因组微卫星富集文库。随机抽样（16次抽样，每库共12—114个克隆）测序发现，6个文库总的微卫星阳性克隆率30．07％，CA／GAT／GTT等3个文库的阳性克隆率达到40％以上。单次抽样最高阳性克隆率达到56％。粘虫微卫星富集文库的建立和高多态性微卫星单拷贝位点的筛选将为粘虫的生态遗传学研究、连锁图谱构建、分子进化和系统发育研究等提供大量遗传标记，对昆虫迁飞的分子生态研究也有重大意义。