H5N1亚型禽流感病毒NS1基因在昆虫细胞中的表达

作     者：刘春国 刘明 张云 杨涛 LIU Chun-guo;LIU Ming;ZHANG Yun;YANG Tao

作者机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001 沈阳农业大学沈阳110161 

出 版 物：《中国生物工程杂志》 (China Biotechnology)

年 卷 期：2006年第26卷第6期

页      面：40-44页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：国家"863"计划资助项目(2003AA241110) 国家"十五"科技攻关项目(2004BA519A19-4) 

主　　题：AIV H5N1 NS1 杆状病毒表达 鉴别抗原 

摘      要：将H5N1亚型禽流感病毒(AIV)NS1基因插入到杆状病毒转移载体pFastBac1中,获得重组转移载体pFastBac1-NS1。将pFastBac1-NS1转化到DH10Bac感受态细胞中,筛选到重组转座子rBacmid-NS1。在脂质体转染试剂介导下将rBacmid-NS1转染对数生长期的Sf9昆虫细胞获得重组杆状病毒rBV-NS1。rBV-NS1感染Sf9细胞后,通过SDS-PAGE、Westernblot和ELISA分析表明:获得了分子量为26kDa的特异性NS1蛋白;并且该蛋白可与H5N1AIV攻毒鸭的血清发生特异性免疫反应,而不能与H5N1AIV灭活疫苗免疫鸭的血清发生反应。试验结果表明:NS1在Sf9昆虫细胞中获得了高效表达,具有与天然蛋白相似的免疫活性,并可以作为区分免疫及自然感染个体的鉴别诊断抗原,为建立禽流感病毒自然感染家禽与禽流感灭活疫苗免疫家禽的鉴别诊断方法奠定了基础。