RMP基因的表达及其对肝癌细胞凋亡的影响

作     者：仲蕾 王晓婷 郭云兰 王琦 季辉 魏文祥 ZHONG Lei;WANG Xiao-ting;GUO Yun-lan;WANG Qi;JI Hui;WEI Wen-xiang

作者机构：苏州大学医学部基础医学与生物科学学院细胞生物学系江苏苏州215123 

出 版 物：《苏州大学学报（医学版）》 (Suzhou University Journal of Medical Science)

年 卷 期：2011年第31卷第5期

页      面：689-693,717页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(81172347) 江苏省自然科学基金资助项目(BK2009121) 华南肿瘤学国家重点实验室开放课题 苏州市科技发展计划项目(SYS201008) 

主　　题：RPB5调节蛋白 多克隆抗体 60Coγ射线 凋亡 肝癌 

摘      要：目的制备RPB5调节蛋白(RMP)抗体并研究RMP在60Coγ射线诱导的SMMC-7721肝癌细胞凋亡过程中的表达及功能。方法 RT-PCR检测HT-29、A549、Hep-2、SGC-7901、293T、HeLa、WI-38和SMMC-7721细胞株中RMP的表达;从质粒中PCR扩增得到人RMP基因并克隆至原核表达载体中,诱导表达后经亲和层析纯化获得融合蛋白GST-RMP/D1,以该蛋白作为抗原免疫家兔制备多克隆抗体;肝癌细胞SMMC-TT21、PFlaG-CMV4-SMMC-7721、PFlaG-CMV4-RMP-SMMC-7721经6 Gy 60 Coγ射线照射后,流式细胞术检测肝癌细胞凋亡的变化。结果RMP在以上细胞系中均有表达,但程度不同;SDS-PAGE鉴定示纯化蛋白为目的蛋白人RMP片段。Western blot结果显示,制备的多抗可与RMP蛋白特异性结合;肝癌细胞株经6 Gy 60Coγ射线照射后,流式细胞术结果表明RMP使肝癌细胞SMMC-7721的凋亡减少。结论 RMP在不同细胞株中均有表达且能减少肝癌细胞SMMC-7727的凋亡,为RMP用于肝癌的基因治疗奠定了基础。