重叠延伸PCR克隆拟南芥ACCase基因和植物表达载体构建

作     者：胡亚平 夏玉平 吴刚 武玉花 肖玲 李均 卢长明 HU Ya-ping;XIA Yu-ping;WU Gang;WU Yu-hua;XIAO Ling;LI Jun;LU Chang-ming

作者机构：中国农业科学院油料作物研究所农业部油料作物生物学重点开放实验室湖北武汉430062 

出 版 物：《中国油料作物学报》 (Chinese Journal of Oil Crop Sciences)

年 卷 期：2009年第31卷第4期

页      面：407-412,420页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 0302[法学-政治学] 03[法学] 030204[法学-中共党史(含：党的学说与党的建设)] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 0305[法学-马克思主义理论] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：国家“863”项目(2006AA10A113) 国家“973”项目(2006CB101600) 

主　　题：重叠延伸PCR 乙酰辅酶A羧化酶 基因克隆 

摘      要：植物的乙酰辅酶A羧化酶(ACCase)催化乙酰辅酶A羧化生成丙二酸单酰辅酶A,是脂肪酸合成的第一步,该步骤是种子脂肪酸合成与含油量形成的关键调控步骤。拟南芥中的真核形式ACCase基因cDNA长约7 000bp,难以直接克隆。本研究先通过常规PCR将其cDNA分成八个重叠的片段分别扩增出来,再用重叠延伸PCR将得到的片段逐步拼接成长度为6 890bp的完整的基因序列,测序证实克隆序列正确无误,最后将其克隆到农杆菌转化植物的载体上。序列分析发现ACCase基因的开放阅读框长度为6 765bp,编码一个含2 254个氨基酸残基的多肽链,推测其分子量约为250kDa。ACCase基因的成功克隆为利用该基因调控油料作物的含油量奠定了良好基础,同时为克隆长度较大的基因提供了一种经济可行的方法。