三类整合酶基因(intⅠ)的简并引物PCR方法建立及应用

作     者：李心晖 石磊 杨维青 曹以诚 张宏梅 尹晓琳 郑美萍 LI Xin-Hui;SHI Lei;YANG Wei-qing;CAO Yi-cheng;ZHANG Hong-mei;YIN Xiao-lin;ZHENG Mei-ping

作者机构：华南理工大学食品与生物工程学院广州510640 河北医科大学基础医学院微生物和免疫教研室 

出 版 物：《中华微生物学和免疫学杂志》 (Chinese Journal of Microbiology and Immunology)

年 卷 期：2005年第25卷第2期

页      面：156-160页

核心收录：

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 10[医学] 

基　　金：国家教育部留学回国人员科研启动金资助项目 (B7 3 2 1 0 90 ) 华南理工大学高水平大学建设项目资助 (B12 3 49) 

主　　题：简并引物PCR 酶基因 方法建立 限制性内切酶分析 PCR扩增产物 PCR方法 PCR法检测 退火温度 PCR反应 梯度PCR 临床分离株 整合子 临床菌株 临床标本 细菌耐药 筛选 阳性 

摘      要：目的 建立一种筛选第一、二和三类整合酶基因 (intⅠ )的简并引物PCR方法 ,并对临床菌株进行整合子筛选和分类。方法 用梯度PCR方法确定PCR反应的最适退火温度 ,并对 1 6株临床标本进行PCR扩增 ,通过对阳性PCR扩增产物的限制性内切酶分析进行整合子分类。结果 根据梯度PCR结果确定最适退火温度为 4 6℃。应用简并引物PCR法检测 1 6株临床分离株 ,其中 8株阳性 ,经酶切分类后确定其中 4株只含有第一类整合酶基因 ,有 3株含有第二类整合酶基因 ,1株同时含有第一类和第二类整合酶基因。结论 建立了一种同时筛选第一、二和三类整合子的方法 ,实际检测显示其可行性 ,为全面细致研究整合子介导的细菌耐药提供了一种快速、简便的方法。