淋病奈瑟菌pIB基因的克隆、原核表达及其表达产物免疫学鉴定

作     者：王桂英 吴文纲 

作者机构：浙江省淳安县计划生育宣传技术指导站浙江淳安311700 浙江省淳安县中医院检验科浙江淳安311700 

出 版 物：《中国卫生检验杂志》 (Chinese Journal of Health Laboratory Technology)

年 卷 期：2009年第19卷第5期

页      面：1068-1070页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100206[医学-皮肤病与性病学] 10[医学] 

主　　题：淋病奈瑟菌 克隆 免疫学鉴定 

摘      要：目的:分析本地区淋病奈瑟菌临床菌株外膜蛋白pIB基因核苷酸及氨基酸序列,构建pIB基因的原核表达系统并鉴定表达产物的免疫反应性,检测标本中pIB基因的表达情况。方法:采用PCR扩增淋病奈瑟菌ATCC49226株的全长pIB基因,T-A克隆测序后与GenBank中相应序列进行相似性比较并构建pIB基因的原核表达系统。采用SDS-PAGE和BioRad凝胶图象分析系统检查目的重组蛋白rPIB表达情况,Ni-NTA亲和层析法提纯rPIB。rPIB免疫家兔以了解其抗原性并采用免疫双扩散试验检测抗血清的效价。采用Western Blot检测rPIB的免疫反应性。建立PIB-ELISA检测标本中pIB基因的表达情况。结果:与GenBank中相应序列比较,克隆的pIB基因核苷酸和氨基酸序列完全相同。rPIB表达量为细菌总蛋白的21.5%,提纯的rPIB经SDS-PAGE后显示为单一的蛋白条带。rPIB能诱导家兔产生特异性抗体,其免疫双扩散效价为1:4。pIB+淋病奈瑟菌感染的病人血清能与rPIB产生阳性Western杂交条带。PIB-ELISA检测淋病病人的脓性分泌物标本的阳性率为82.3%。结论:结果表明本研究成功地克隆并构建淋病奈瑟菌pIB基因及其原核表达系统,该表达系统能有效地表达rPIB。rPIB有良好的抗原性和免疫反应性,rPIB免疫家兔制备的抗血清特异性高。可作为研制淋病基因工程疫苗及实验室诊断方法的侯选抗原。