FLAG标记的GIRK4通道的构建、表达及其对GIRK4功能的影响

作     者：耿仙 冯承保 吴建民 杨会茹 宋新梅 

作者机构：河北大学医学部药理教研室保定071002 河北省保定市第二医院肿瘤科保定071000 河北省新乐市医院外科新乐050700 河北省新乐市医院儿科新乐050700 

出 版 物：《中国中医药现代远程教育》 (Chinese Medicine Modern Distance Education of China)

年 卷 期：2012年第10卷第24期

页      面：149-150页

学科分类：1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100706[医学-药理学] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

基　　金：河北省卫生厅医学科学研究指导项目[No:20110513] 保定市科技局指导项目(10ZF065) 河北大学校内基金[No:2010Q39] 

主　　题：FLAG 重组DNA GIRK4 PCR 免疫细胞学 

摘      要：目的在GIRK4通道蛋白中加入FLAG标记短肽,并检测通道功能是否受到影响。方法运用聚合酶链式反应(PCR)技术合成带有FLAG标记的GIRK4通道片段,并将该片段插入至载体pGEMHE质粒DNA中。使用免疫印迹检测FLAG短肽是否与GIRK4通道蛋白融合,并使用双电极电压钳(two-microelectrodevoltageclamp,TEVC)检测通道的表达情况。结果经测序鉴定,确认成功构建了重组质粒DNA即FLAG-GIRK4-pGEMHE,使用双电极电压钳检测有通道电流。结论通过PCR技术成功构建重组质粒DNA,即FLAG-GIRK4-pGEMHE,且FLAG标记蛋白已稳定表达并且未影响GIRK4通道蛋白的功能,为今后研究GIRK4通道蛋白功能提供了简便途径。