天然产物莱菔素通过下调CRM1表达抑制套细胞淋巴瘤细胞增殖

作     者：王海娜 蔡娟 楚慧郢 李国辉 杨永亮 WANG Haina;CAI Juan;CHU Huiying;LI Guohui;YANG Yongliang

作者机构：大连理工大学生命科学与技术学院分子药物中心辽宁大连116024 辽宁师范大学物理与电子技术学院辽宁大连116023 中国科学院大连化学物理研究所分子反应动力学国家重点实验室辽宁大连116023 

出 版 物：《肿瘤》 (Tumor)

年 卷 期：2018年第38卷第12期

页      面：1117-1129页

核心收录：

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主　　题：淋巴瘤,膜细胞 抗肿瘤药,植物 主动转运,细胞核 细胞凋亡 染色体区域维持因子1 莱菔素 

摘      要：目的:研究染色体区域维持因子1(chromosomal region maintenance 1,CRM1)在套细胞淋巴瘤中的表达情况,并进一步探讨天然产物莱菔素LFS-01抑制套细胞淋巴瘤细胞增殖的分子机制。方法 :通过Oncomine数据库挖掘分析CRM1在套细胞淋巴瘤中的表达水平。用LFS-01处理套细胞淋巴瘤JeKo-1细胞后,采用CCK-8法检测细胞增殖活性,激光共聚焦显微镜下观察CRM1蛋白的核转运功能,蛋白质印迹法检测CRM1蛋白表达水平,FCM法检测和透射电子显微镜观察细胞周期和凋亡,蛋白质印迹法检测凋亡通路相关蛋白表达,CCK-8和FCM法检测凋亡抑制剂z-VAD-FAM对LFS-01作用的影响。构建CRM1基因突变的慢病毒稳定感染的JeKo-1细胞,激光共聚焦显微镜和CCK-8法再次检测LFS-01对CRM1核转运和细胞增殖的影响。通过RNAseq数据分析LFS-01作用后JeKo-1细胞转录组水平的变化,并采用CCK-8法检测Toll样受体(Toll-likereceptor,TLR)抑制剂TAK-242和LFS-01联用对JeKo-1细胞增殖的影响。结果 :CRM1在套细胞淋巴瘤中呈现高表达(P 0.05)。LFS-01能够抑制JeKo-1细胞增殖,24和48 h时的半数抑制浓度(50%inhibitory concentration,IC50)分别为5.81μmol/L和9.09μmol/L。20.0μmol/L LFS-01可明显抑制CRM1的核转运功能(P 0.05);6.0μmol/LLFS-01可明显下调CRM1的表达水平(P 0.05);10.0μmol/L LFS-01可将细胞周期抑制在G2/M期,并诱导细胞凋亡(P值均0.05);4μmol/L LFS-01可明显上调凋亡通路蛋白聚腺苷二磷酸核糖聚合酶、剪切型caspase-3和剪切型caspase-9(P值均0.01)的表达。凋亡抑制剂z-VAD-FAM可逆转LFS-01的凋亡诱导作用(P 0.01)。当CRM1基因突变后,LFS-01失去靶向抑制CRM1核转运和细胞增殖的功能(P值均0.01)。RNAseq分析表明LFS-01对细胞增殖相关信号通路有明显的抑制作用(P 0.01),并且TLR抑制剂TAK-242联合LFS-01用药具有协同抗肿瘤作用(P 0.01)。结论 :LFS-01可诱导套细胞淋巴瘤细胞发生周期阻滞和凋亡,其中CRM1是一个关键蛋白。TLR抑制剂TAK-242和LFS-01具有协同抗肿瘤作用。