树鼩IgE高亲和力受体α亚基单克隆抗体的制备及鉴定

作     者：张晶晶 肖红剑 龙琼 浦滔 李智华 寸韡 ZHANG Jing-Jing;XIAO Hong-Jian;LONG Qiong;PU Tao;LI Zhi-Hua;CUN Wei

作者机构：中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118 

出 版 物：《生物技术通讯》 (Letters in Biotechnology)

年 卷 期：2018年第29卷第6期

页      面：748-751页

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 08[工学] 09[农学] 100102[医学-免疫学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 10[医学] 

基　　金：云南省卫生和计划生育委员会医学学科带头人培养计划(D-2017003) 重大新药创制(2018ZX09738003-007) 中国医学科学院医学与健康科技创新工程(重大协同创新项目)(2016-I2M-1-013) 

主　　题：树鼩 IgE高亲和力受体α亚基 单克隆抗体 

摘      要：目的:制备抗树鼩IgE高亲和力受体α亚基(FcεRIα)的单克隆抗体,并对其免疫学特性进行检测。方法:采用大肠杆菌原核表达树鼩IgE FcεRIα蛋白,经过纯化后免疫BALB/c小鼠,取免疫鼠脾细胞与Sp2/0细胞融合;通过ELISA法和有限稀释法筛选杂交瘤细胞;利用Protein A纯化单克隆抗体,Western印迹检测其特异性,间接免疫荧光及免疫组化对单克隆抗体进行分析。结果:用纯化的树鼩IgE FCεRIα蛋白免疫小鼠,选取效价高的小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞Sp2/0融合,经过3轮亚克隆筛选,筛选出5株抗树鼩IgE FCεRIα单克隆抗体,分别命名为HC020、HC021、HC022、HC023和HC024,细胞间接免疫荧光表明5株单克隆抗体均能检测到293T细胞中表达的IgE FCεRIα,其中HC020、HC022、HC024能够通过免疫组化检测组织切片中的IgE FCεRIα。结论:制备了5株IgE FCεRIα单克隆抗体,为今后研究树鼩IgE FCεRIα奠定了基础。