活性氧促进中性粒细胞与骨髓基质细胞黏附及机制初探

作     者：尤媛媛 许倩 祝飞美 任泓宇 杜宇 苗峻铭 王祎 陈善泽 陈军利 王晓樱 李婧瑜 黄宁 YOU Yuan-yuan;XU Qian;ZHU Fei-mei;REN Hong-yu;DU Yu;MIAO Jun-ming;WANG Yi;CHEN Shan-ze;CHEN Jun-li;WANG Xiao-ying;LI Jing-yu;HUANG Ning

作者机构：四川大学华西基础医学与法医学院病理生理教研室四川成都610041 

出 版 物：《中国病理生理杂志》 (Chinese Journal of Pathophysiology)

年 卷 期：2018年第34卷第12期

页      面：2255-2260页

核心收录：

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100102[医学-免疫学] 100104[医学-病理学与病理生理学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(No.31401188 No.81470931 No.31701098 No.81803648 No.81803183) 四川省应用基础研究计划项目(No.2016JY0027) 四川大学优秀青年学者科研基金项目(No.2016SCU04A08) 

主　　题：活性氧 中性粒细胞 骨髓基质细胞 细胞黏附 谷氧还蛋白1 

摘      要：目的:探讨活性氧对中性粒细胞与骨髓基质细胞(BMSCs)黏附的影响及其机制。方法:采用密度梯度离心法从小鼠胫骨和股骨分离骨髓中性粒细胞,并用DMSO诱导HL60细胞分化为成熟中性粒细胞(d HL60细胞)。利用分光光度法检测CFDA-SE标记的小鼠骨髓中性粒细胞和d HL60细胞在H_2O_2刺激下与BMSCs的黏附。利用荧光显微成像技术和Western blot检测携带去谷胱甘肽化酶谷氧还蛋白1(Grx1)表达载体的慢病毒感染的d HL60细胞中Grx1的表达。PCR检测Grx1敲除小鼠的基因型。结果:(1) Diff-Quick染色显示,分离的骨髓中性粒细胞纯度高于90%; H_2O_2处理后,中性粒细胞与BMSCs黏附率显著增加(P 0. 01)。(2)荧光显微镜观察和Western blot结果表明,Grx1稳转株d HL60细胞中Grx1的表达水平较空载体稳转株细胞显著增加;体外黏附实验表明过表达Grx1的d HL60细胞较对照组d HL60细胞,在相同H_2O_2浓度下,黏附到BMSCs程度显著下降(P 0. 01)。(3)经PCR鉴定,实验所用基因敲除小鼠在全基因水平上未见Grx1;且敲除Grx1的小鼠较野生型小鼠,在相同浓度H_2O_2刺激下,其骨髓中性粒细胞与BMSCs黏附率显著升高。(4)血管细胞黏附分子1(VCAM-1)抗体预处理BMSCs后,由H_2O_2引起的d HL60与BMSCs之间的黏附增强回复到了静息水平。结论:活性氧促进骨髓中中性粒细胞与BMSCs的黏附,其可能的机制是通过诱导VCAM-1黏附信号的S-谷胱甘肽化。