人细胞色素CYP2E1基因重组杆状病毒粘粒构建

作     者：徐田雪 吴丽霞 游雪甫 XU Tian-xue;WU Li-xia;YOU Xue-fu

作者机构：中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所药理室北京100050 沈阳医学院沈洲医院 

出 版 物：《中国公共卫生》 (Chinese Journal of Public Health)

年 卷 期：2008年第24卷第6期

页      面：683-684页

学科分类：07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 090102[农学-作物遗传育种] 0710[理学-生物学] 1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100706[医学-药理学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金(30472058,30672502) 国家“十五”科技重大专项基金(2003AA2Z347D) 北京市自然科学基金(7062044) 

主　　题：细胞色素P450 基因克隆 杆状病毒 PCR 

摘      要：目的构建人细胞色素P450 2E1(CYP2E1)基因cDNA重组的杆状病毒粘粒。方法采用PCR方法,从国外获赠的含有CYP2E1基因cDNA的质粒中扩增CYP2E1 cDNA。将该基因的cDNA连接到测序载体pCMV-Myc载体上,通过内切酶分析及测序加以鉴定,然后将该基因的cDNA克隆到转座载体pFASTBac1载体,转化入DH10Bac大肠埃希菌感受态细胞中,提取含有CYP2E1基因的重组杆状病毒粘粒,并经PCR鉴定分析。结果测序结果显示,该克隆片段含有CYP2E1完整的编码区,所获得的重组杆状病毒粘粒含有完整1.5kb大小的该片段。结论获得重组CYP2E1杆状病毒粘粒,为下一步转染昆虫细胞,利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统大量表达人细胞色素P450 2E1蛋白打下基础。