低氧诱导因子-1的病毒载体制备及感染效果

作     者：张翠萍 付小兵 李淑云 孙同柱 ZHANG Cui-ping;FU Xiao-bing;Li Shu-yun

作者机构：解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室全军烧伤研究所北京100037 

出 版 物：《中华实验外科杂志》 (Chinese Journal of Experimental Surgery)

年 卷 期：2008年第25卷第12期

页      面：1587-1588页

核心收录：

学科分类：10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(30800442) 国家“973”计划资助项目(2005CB522603) 

主　　题：低氧诱导因子-1 腺病毒 表皮角质细胞 

摘      要：目的制备低氧诱导因子（HIF）-1腺病毒载体并评价其对表皮角质细胞的感染效果。方法Ad／HIF-1质粒经酶切鉴定后，以4μg质粒转染1．2×10^6个HEK293细胞，2d后荧光显微镜下观察转染效率。1周后收集细胞及上清并感染HEK293细胞进行病毒扩增，待扩增的细胞及上清量达300ml时进行病毒纯化及滴度测定。最后用制备的病毒载体感染表皮角质细胞，流式测定其感染效果。结果Ad／HIF-1质粒酶切鉴定正确；转染或感染HEK293细胞后有绿色荧光蛋白（GFP）表达；获得的腺病毒滴度为1．8×10^11PFU／ml。病毒以MOI=50感染表皮细胞，2d后GFP阳性细胞的比例为97．46％。结论成功制备了HIF-1腺病毒载体，且感染表皮角质细胞后能得到较高的感染效率，从而为腺病毒介导的基因功能研究提供理论基础。