不同载体构建人神经生长因子的比较

作     者：戚菁 李素芹 李琳 潘明洁 李越希 

作者机构：南京医科大学基础医学院生物化学与分子生物学系江苏南京210029 南京军区军事医学研究所江苏南京210002 

出 版 物：《药物生物技术》 (Pharmaceutical Biotechnology)

年 卷 期：2009年第16卷第1期

页      面：37-42页

学科分类：0710[理学-生物学] 071010[理学-生物化学与分子生物学] 081704[工学-应用化学] 07[理学] 08[工学] 0817[工学-化学工程与技术] 

主　　题：人神经生长因子 基因克隆 真核表达 生物活性 

摘      要：探讨人神经生长因子(hNGF)在不同信号肽同一载体与不同载体表达量的差异。应用分子生物学技术从pcDNA3·1-β-NGF中获得β-NGF基因,并对它进行替换载体和优化信号肽,构建两个新重组质粒pMD902-β-NGF和pcDNA3·1-His-β-NGF,通过酶切、PCR及测序鉴定,重组质粒构建成功;利用脂质体转染技术,将重组质粒pMD902-β-NGF、pcDNA3·1-β-NGF和pcDNA3·1-His-β-NGF转入中国仓鼠卵巢细胞(CHO细胞)中,通过ELISA技术,检测到CHO细胞上清中有NGF的表达,优化信号肽的pcDNA3·1-His-β-NGF表达量高于没有优化信号肽的pcDNA3·1-β-NGF,重组质粒pMD902-β-NGF表达量最低。鸡胚背根神经节法检测,表达产物都能促进神经节的生长。通过实验分析发现,3个重组质粒表达水平有较大差异。