人源性bFGF单链抗体的筛选、表达及鉴定

作     者：王宏 陶俊 邓宁 周丽君 向军俭 WANG Hong;DENG Ning;XIANG Jun-jian

作者机构：暨南大学生命科学技术学院抗体工程中心广州510632 南方医科大学基础医学院免疫教研室 解放军海军总医院中心实验科 

出 版 物：《中华微生物学和免疫学杂志》 (Chinese Journal of Microbiology and Immunology)

年 卷 期：2010年第30卷第7期

页      面：674-677页

核心收录：

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100102[医学-免疫学] 10[医学] 

基　　金：基金项目:国家科技计划“863”专题课题(2009AA02Z112) 

主　　题：噬菌体展示 抗体库 bFGF 人源性抗体 单链抗体 

摘      要：目的 用重组人碱性成纤维细胞生长因子（rhbFGF）筛选大容量人源噬菌体抗体库,获得能与bFGF特异性结合的人源性单链抗体（scFv）.方法 用rhbFGF对大容量人源噬菌体抗体库进行4轮＂吸附-洗脱-扩增＂筛选,并通过phage ELISA法对随机挑选的克隆进行抗原结合活性测定,得到的阳性克隆进一步进行原核可溶性表达及鉴定.结果 从104个随机挑选的克隆中,筛得39株抗bFGF的抗体,通过对抗体可变区基因进行多样性分析,发现存在8种不同抗体可变区基因,挑选其中8株phage ELISA显色最高的克隆进行酶切和测序鉴定,发现其中7株为正确的抗体基因序列,通过大肠杆菌成功的进行了scFv的可溶性表达,通过竞争ELISA发现其中一株scFv能够抑制bFGF与其高亲和力受体FGFR1βⅢC的结合.结论 通过筛选噬菌体抗体库获得到7株抗bFGF特异性抗体,其中一株抗体能够抑制bFGF与其高亲和力受体FGFR1的结合.