海马神经干细胞不同传代方法的比较

作     者：李梅 王湘臻 徐铁军 Li Mei;Wang Xiang-zhen;Xu Tie-jun

作者机构：徐州医学院解剖学和神经生物学教研室江苏省徐州市221002 

出 版 物：《中国组织工程研究与临床康复》 (Journal of Clinical Rehabilitative Tissue Engineering Research)

年 卷 期：2011年第15卷第6期

页      面：985-989页

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 071007[理学-遗传学] 

基　　金：江苏省自然科学基金(BK2009087) 江苏省高校研究生科研创新计划项目(CX10S-024Z) 

主　　题：神经干细胞 海马 细胞培养 传代 免疫细胞化学 大鼠 

摘      要：背景:体外培养神经干细胞,在悬浮培养时由于自身增殖特性会形成球,传代时将会面临如何将细胞球分离成单细胞的问题。目的:寻求理想的大鼠海马神经干细胞传代方法,以获得大量可增生的神经干细胞以供研究。方法:分离新生1dSD大鼠海马神经干细胞,原代培养至五六天时,分别用机械吹打法、胰蛋白酶、TrypLE和Accutase消化法分离神经干细胞球。之后每7d传代1次,连续传代3次。分别于每次传代后第1天和传代后第4天计数活细胞比例和细胞球数目,实验重复3次。结果与结论:神经干细胞球经3种酶消化后获得的均是单细胞;经机械吹打后既有单个细胞,也有小细胞球分布于培养液中。在酶消化法中,Accutase消化法传代后神经干细胞的活细胞比例明显高于胰蛋白酶消化(P0.01)和TrypLE消化法(P0.05)。同时,Accutase消化法传代后新形成的细胞球数目也较其余各组多(P0.01)。提示在实验条件下,Accutase消化法能够较好地将神经干细胞球分离成存活率较高、能快速形成新的克隆球的单个细胞,是较为理想的神经干细胞分离传代方法。