HCV免疫学诊断抗原与链亲和素融合蛋白的制备及应用研究

作     者：张庭瑛 鲁健 赵敏 赵国霞 邓瑶 毕胜利 高基民 谭文杰 ZHANG Tingying;ZHAO Min;ZHAO Guo-xia;GAO Ji-min

作者机构：温州医学院医学病毒学研究所浙江325000 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所病毒基因工程国家重点实验室 

出 版 物：《中华实验和临床病毒学杂志》 (Chinese Journal of Experimental and Clinical Virology)

年 卷 期：2011年第25卷第3期

页      面：230-232页

核心收录：

学科分类：1004[医学-公共卫生与预防医学(可授医学、理学学位)] 100401[医学-流行病与卫生统计学] 10[医学] 

基　　金：基金项目:十一五传染病重大专项(2009ZX10004-715) 

主　　题：肝炎病毒属 抗原 抗生蛋白链菌素 病毒融合蛋白质素 

摘      要：目的 制备带有链亲和素（SA）标签的丙型肝炎病毒（HCV）融合蛋白,并初步探讨其在抗-HCV ELISA检测中的应用.方法 构建了HCV诊断抗原与链亲和素融合蛋白重组表达质粒pET-11d-C44P-SA,在大肠埃希菌BL21（DE3）中表达,并用Western Blot进行鉴定,表达的融合蛋白经镍金属螯合（Ni-NTA）层析柱进行纯化,透析复性后分别包被生物素化以及普通酶联板,进行人血清抗-HCV检测.结果 成功构建了带有SA标签的重组表达质粒,其在大肠埃希菌BL21（DE3）中实现高效表达,制备的融合蛋白纯度可达90%以上.建立ELISA法进行人血清抗-HCV检测显示：融合蛋白包被生物素化酶联板检测灵敏度与特异性明显高于普通酶联板.结论 构建的融合蛋白作为包被抗原,结合利用SA标签与生物素化酶联板,明显提高了抗-HCV检出的灵敏度与特异性,该策略为进一步提高抗-HCV检测试剂的质量打下了基础.