靶向RNA干扰骨桥蛋白基因的慢病毒载体对血管平滑肌细胞增殖凋亡的影响

作     者：邱志兵 陈鑫 薛昊 许欢 徐明 蒋英硕 汪黎明 肖立琼 QIU Zhi-bing;CHEN Xin;XUE Hao;XU Huan;XU Ming;JIANG Ying-shuo;WANG Li-ming;XIAO Li-qiong

作者机构：南京医科大学附属南京第一医院南京市心血管病医院心胸外科210006 

出 版 物：《中华实验外科杂志》 (Chinese Journal of Experimental Surgery)

年 卷 期：2012年第29卷第4期

页      面：585-588页

核心收录：

学科分类：1002[医学-临床医学] 100201[医学-内科学(含：心血管病、血液病、呼吸系病、消化系病、内分泌与代谢病、肾病、风湿病、传染病)] 10[医学] 

基　　金：“十二五”江苏省医学重点人才课题 南京市医学科技发展计划资助项目(YKK08090) 

主　　题：骨桥蛋白 血管平滑肌细胞 血管再狭窄 RNA干扰 慢病毒 

摘      要：目的构建大鼠骨桥蛋白（OPN）基因的shRNA慢病毒表达载体，并观察其对大鼠血管平滑肌细胞（VSMC）增殖和凋亡的影响。方法针对OPN基因的不同部位设计3对shRNA的寡核苷酸片段，克隆到慢病毒载体PLKO-1中，构建靶向OPN基因的慢病毒载体PLKO-1-OPN-shRNA，检测并筛选最佳抑制效率的shRNA干扰载体。并将其转染大鼠血管平滑肌细胞，用逆转录-聚合酶链反应（***）检测VSMCsOPNmRNA表达水平；蛋白免疫印迹法（Westernblot）检测VSMCOPN蛋白表达水平；噻唑蓝（MTT）比色法和流式细胞仪检测沉默OPN基因后对VSMC增殖和凋亡能力的影响。结果靶向OPN慢病毒表达载体构建成功。重组慢病毒载体PLKO-1-OPN—shRNA转染后可显著抑制VSMCs的OPNmRNA及蛋白的表达水平，OPN蛋白表达明显下降，其中以PLKO-1-OPN2-shRNA最为明显，达到90％以上；转染PLKO-1-OPN2-shRNA后72h的细胞增殖能力[吸光度（A）值=0．365±0．011]明显低于未处理组（A值=0．941±0．028）和阴性对照组细胞（A值：0．941±0．040，P〈0．05）；而早期细胞凋亡率（20．44±2．69）％和晚期细胞凋亡率（16．79±1．01）％均明显高于未转染组和阴性对照组（P〈0．01）。结论成功构建并筛选最佳抑制效率的靶向OPN慢病毒表达载体PLKO-1-OPN2-shRNA，该载体能有效抑制大鼠血管平滑肌细胞增殖，并促进细胞凋亡。