基于鞭毛蛋白的H5亚型禽流感疫苗候选株的构建及鉴定

作     者：王静 康喜龙 焦扬 熊丹 宋丽 杨芸 潘志明 焦新安 

作者机构：扬州大学江苏省人兽共患病学重点实验室、禽类预防医学教育部重点实验室江苏扬州225009 

出 版 物：《细胞与分子免疫学杂志》 (Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology)

年 卷 期：2014年第30卷第2期

页      面：117-120,130页

核心收录：

学科分类：090603[农学-临床兽医学] 1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 100705[医学-微生物与生化药学] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 100103[医学-病原生物学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金(31172299) 教育部“新世纪优秀人才支持计划”项目(NCET-12-0745) 江苏省第四期“333工程”第三层次培养对象项目 江苏省第九批“六大人才高峰”高层次人才项目(NY-028) 江苏省高校“青蓝工程”中青年学术带头人项目(2012年度) 教育部创新团队基金(IRT0978) 江苏省优势学科建设工程(2010年) 

主　　题：H5亚型禽流感 鞭毛蛋白 血凝素 原核表达 

摘      要：目的构建基于鞭毛蛋白的H5亚型禽流感疫苗候选株。方法以H5N1禽流感病毒血凝素(HA)基因和鼠伤寒沙门菌SL7202基因组为模板,通过重叠PCR扩增出HA1-2-fljB基因片段,将其插入原核表达载体pET32a(+),构建重组质粒pET32a-HA1-2-fljB,再将其转化表达菌*** BL21(DE3),IPTG诱导目的蛋白表达。SDS-PAGE和Western blot法鉴定分析融合蛋白HA1-2-fljB。通过刺激HEK293-TLR5细胞,检测融合蛋白的TLR5生物学活性。结果正确构建出重组质粒pET32aHA1-2-fljB,SDS-PAGE显示,融合蛋白HA1-2-fljB相对分子质量(Mr)约为100 000,Western blot法表明融合蛋白具有良好的免疫反应性。TLR5生物活性实验结果显示,与HA1-2蛋白刺激组相比,HA1-2-fljB诱导HEK293-TLR5细胞分泌了高水平的IL-8(P0.01)。结论成功表达出具有TLR5活性的融合蛋白HA1-2-fljB,为研究H5亚型禽流感新型疫苗奠定了基础。