Rap2c基因真核表达质粒的构建与表达

作     者：吴金霞 郑骏年 裴冬生 WU Jinxia;ZHENG Junnian;PEI Dongsheng

作者机构：徐州医学院肿瘤生物治疗实验室江苏徐州221002 徐州医学院生理学教研室江苏徐州221004 徐州医学院附属医院临床肿瘤中心江苏徐州221004 

出 版 物：《徐州医学院学报》 (Acta Academiae Medicinae Xuzhou)

年 卷 期：2014年第34卷第9期

页      面：561-564页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金(81372172) 教育部重点课题(212062) 

主　　题：Rap2c 基因克隆 真核表达 

摘      要：目的：为了探讨Rap2c基因与肺癌发生的关系，克隆人Ras家族小G蛋白Rap2c的cDNA，构建其真核表达质粒并在人肺癌细胞株A549和H1299中表达。方法人骨肉瘤细胞株U2OS提取细胞总RNA，经逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）逆转录成cDNA，PCR扩增Rap2c，酶切后插入pcDNA3．1（＋）构建真核表达质粒 pcD-NA3．1（＋）-Rap2c，采用酶切及测序鉴定。重组质粒转染A 549和H 1299细胞，Western blot 检测其目的基因表达。结果双酶切及测序结果显示重组质粒pcDNA3．1（＋）-Rap2c成功构建，Werstern blot 检测到 A549和H 1299细胞有相应蛋白表达。结论成功构建人Rap2c基因真核表达质粒，为后续研究奠定了基础。