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内蒙古自治区呼和浩特市赛罕区大学西街235号 邮编: 010021
作者机构:徐州医学院肿瘤生物治疗实验室江苏徐州221002 徐州医学院生理学教研室江苏徐州221004 徐州医学院附属医院临床肿瘤中心江苏徐州221004
出 版 物:《徐州医学院学报》 (Acta Academiae Medicinae Xuzhou)
年 卷 期:2014年第34卷第9期
页 面:561-564页
学科分类:1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学]
基 金:国家自然科学基金(81372172) 教育部重点课题(212062)
摘 要:目的:为了探讨Rap2c基因与肺癌发生的关系,克隆人Ras家族小G蛋白Rap2c的cDNA,构建其真核表达质粒并在人肺癌细胞株A549和H1299中表达。方法人骨肉瘤细胞株U2OS提取细胞总RNA,经逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)逆转录成cDNA,PCR扩增Rap2c,酶切后插入pcDNA3.1(+)构建真核表达质粒 pcD-NA3.1(+)-Rap2c,采用酶切及测序鉴定。重组质粒转染A 549和H 1299细胞,Western blot 检测其目的基因表达。结果双酶切及测序结果显示重组质粒pcDNA3.1(+)-Rap2c成功构建,Werstern blot 检测到 A549和H 1299细胞有相应蛋白表达。结论成功构建人Rap2c基因真核表达质粒,为后续研究奠定了基础。