Versican基因RNAi慢病毒载体的构建及其对毛乳头细胞聚集性生长的干预作用

作     者：封明霞 伍津津 杨桂红 Feng Mingxia;Wu Jinjin;Yang Guihong

作者机构：第三军医大学大坪医院野战外科研究所呼吸科重庆400042 第三军医大学大坪医院野战外科研究所皮肤科重庆400042 

出 版 物：《第三军医大学学报》 (Journal of Third Military Medical University)

年 卷 期：2015年第37卷第14期

页      面：1460-1465页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 07[理学] 100101[医学-人体解剖与组织胚胎学] 071007[理学-遗传学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金面上项目(30771934) 

主　　题：多功能蛋白聚糖类 RNA干扰 慢病毒 毛乳头细胞 聚集性生长 

摘      要：目的构建Versican基因RNAi慢病毒载体并研究Versican对毛乳头细胞聚集性生长的干预作用。方法根据人Versican基因序列,构建4个携带RNAi序列的慢病毒载体,利用293T细胞进行慢病毒包装。实验分为Control组(不做处理)、NC组(用空慢病毒载体包装的病毒转染细胞)和KD1、KD2、KD3、KD4 Versican RNAi慢病毒感染组。应用KD1、KD2、KD3、KD4 Versican RNAi慢病毒及NC慢病毒感染H1299细胞,荧光显微镜下观察感染效率,应用Real-time PCR检测Versican的表达,筛选出感染效率和特异性最高的慢病毒载体进行下一步研究。用慢病毒感染毛乳头细胞后,用Real-time PCR检测Versican基因的表达,并用Western blot检测Versican、ADAMTS4、p-c-JUN蛋白的表达,应用光镜观察毛乳头的生长情况。结果成功构建4种慢病毒载体,其中KD2慢病毒感染H1299细胞较其他慢病毒、Control和NC组显著下调Versican mRNA的表达(P0.01)。应用KD2慢病毒感染毛乳头细胞后,较Control和NC组明显下调毛乳头细胞Versican mRNA和蛋白的表达(P0.01),ADAMTS4、p-c-JUN蛋白的表达较Control组明显下调(P0.01),毛乳头细胞聚集性生长的特性消失。结论成功构建了Versican基因RNAi慢病毒载体。Versican基因通过c-JUN-ADAMTS-4通路调控毛乳头细胞的聚集性生长。