脊尾白虾热休克蛋白HSP90基因的原核表达与鉴定

作     者：韩俊英 李健 李吉涛 陈萍 李华 HAN Jun-ying;LI Jian;LI Ji-tao;CHEN Ping;LI Hua

作者机构：大连海洋大学116023 农业部海洋渔业资源可持续利用重点开放实验室中国水产科学研究院黄海水产研究所青岛266071 

出 版 物：《渔业科学进展》 (Progress in Fishery Sciences)

年 卷 期：2011年第32卷第5期

页      面：44-50页

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 0906[农学-兽医学] 09[农学] 071002[理学-动物学] 

基　　金：公益性行业(农业)科研专项(nyhyzx07-042 200803012) 国家虾产业技术体系(CARS-47) 科技部农业科技成果转化资金项目(2010GB23260589)共同资助 

主　　题：脊尾白虾 热休克蛋白90 原核表达 

摘      要：将脊尾白虾热休克蛋白90基因克隆到原核表达载体pET-30a中,经酶切验证和DNA测序鉴定后,将重组质粒转化表达宿主大肠杆菌Rosetta,优化温度、时间、IPTG和OD600表达条件进行诱导表达,收集菌液,进行SDS-PAGE和质谱检测,并用Quantity one软件分析蛋白表达水平。结果表明,成功构建了含脊尾白虾HSP90基因的重组表达载体pET-30a-HSP90,表达目的蛋白相对分子量为82.7kD,为HSP90蛋白。通过条件优化认为重组菌株Rosetta/pET-30a-HSP90的最佳诱导温度为37℃,最佳IPTG浓度为1.0mmol/L,最佳诱导时机和诱导时间分别为0.58h、7h。